常见的荧光素酶有两种,分别是萤火虫荧光素酶(fireflyluciferase,编码基因是luc)和海肾荧光素酶(Renillaluciferase,编码基因是Rluc),前者的底物是D-Luciferin,后者的底物是Coelenterazine。它们共同的作用原理是在ATP和荧光素酶的催化作用下,底物被氧化发光(不同底物光的颜色和波长不同),当底物过量时,产生的光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关性。***成像技术(opticalinvivoimaging)目前主要采用生物发光(bioluminescence)与荧光(fluorescence)两种技术,生物发光法是基于荧光素酶能催化底物(D-Luciferin或Coelenterazine)化学发光的原理,将体外能稳定表达荧光素酶的细胞株植入动物体内,与后期注射入体内的底物发生反应,利用光学系统检测光强度,间接反映出细胞数量的变化或细胞的定位。这项技术已被广泛应用于多个领域常用的有**或疾病动物模型的建立,并可用于病毒学研究、siRNA研究、干细胞研究、蛋白质相互作用研究等。以下主要介绍D-Luciferin(D荧光素)的分类:D-Luciferin:有三种,分别是D-Luciferin,SodiumSalt/D荧光素钠盐、D-Luciferin,PotassiumSalt/D-荧光素钾盐和D-LuciferinFirefly,freeacid/D-萤火虫荧光素。做D-荧光素钾盐测试哪个公司好?宿迁专业做D-荧光素钾盐使用说明
请穿实验服并戴一次性手套操作。8)本产品只作科研用途!D-荧光素钾盐是荧光素酶的水溶性底物,存在于多种发光生物体中。在ATP和荧光素酶的催化作用下,D-荧光素钾被氧化,产生蓝绿色的光(560nm),当底物过量时,产生的Chemicalbook光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关。编码荧光素酶的Luc基因是植物、哺乳动物细胞的常用报告基因。由于没有背景干扰,因此可以很容易地检测出低至。用途D-荧光素钾盐是一类在生物体中发现的能引起生物发光的杂环化合物,如萤火虫。在ATP存在下,萤光素酶将其氧化脱羧后会发光。化学研究中可用于荧光素酶的基板。生物活性D-Luciferin是萤火虫荧光素酶的底物。体外研究D-luciferinisthenaturalsubstrateoftheenzymeluciferase(Luc),μM.体内研究Bioluminescenceimaging(BLI)usingthefireflyluciferase(Fluc)(5,10,15,and20min)μLofD-luciferin(intraperitoneallyorintravenously)stocksolutionpergramofbodyweight:normally~200μLfora20gmouseforastandard150mg/(eitherPotassiumorSodiumSalt)atroomtemperatureanddissolveindPBS。徐州荧光素酶D-荧光素钾盐浓度D-荧光素钾盐合作需要交押金吗?
故根据荧光反应的情况可以检测样品中的微生物含量。APT荧光检测仪***用于食品、饮用水、餐饮器具等的微生物快速检测。1970年,科学家***次测定了萤火虫荧光素酶的结构;1985年,科学家***克隆了一种萤火虫荧光素酶基因,并在大肠杆菌中表达,从而得到了具有活性的荧光素酶;1986年,科学家们测定了该种萤火虫荧光素酶的基因序列。随后,各种萤火虫荧光素酶基因相继克隆成功,荧光素酶的研究和应用不断发展。目前,荧光素酶发光系统的分析技术已经广泛应用到医学、生命科学、环境科学、微生物学等许多领域。以医学领域为例,**们将荧光素酶基因嵌入到*细胞中,再注入荧光素,使*细胞发光,通过探测荧光,就能监测*细胞的扩散和转移。同理,用这种方法能对致病基因、***免疫机制等进行研究,对某些疾病进行诊断,监测疫苗、药物和治疗方法的效力。
可用荧光素酶检测系统灵敏方便地测定荧光素酶基因的表达。荧光素酶报告基因有许多优点:①非放射性;②比CAT及其他报告基因速度快;③比CAT灵敏100倍;④荧光素酶在哺乳细胞中的半衰期为3小时,在植物中的半衰期为3.5小时。由于半衰期短,故启动子的改变会即时导致荧光素酶活性的改变,而荧光素酶不会积累。相反,CAT在哺乳细胞中的半衰期为50小时。荧光素酶浓度在10—16mol/L(10pS/L)到10-8mol/L(1mg/L)范围内,荧光信号强度与酶浓度成正比。在理想条件下,可检测到l0-20mol/L的荧光素酶。检测步骤:1.用生物信息学方法分析并预测启动子区可能的转录因子结合位点。2.设计引物用PCR法从基因组DNA中克隆所需的靶启动子片段,将此片段插入到荧光素酶报告基因质粒(pGL3-basic)中。3.筛选阳性克隆,测序。扩增克隆并提纯质粒备用。4.扩增转录因子质粒,提纯备用。同时准备相应的空载质粒对照,提纯备用。5.培养293(或其它目的细胞),并接种于24孔板中,生长10-24小时(80%汇合度)。6.将报告基因质粒与转录因子表达质粒共转染细胞。7.提取蛋白并用于荧光素酶检测。8.加入底物,测定荧光素酶的活性。9.计算相对荧光强度,并与空载对照比较。做D-荧光素钾盐测试品牌有哪些?
5)对于检测灵敏度要求特别高的实验,建议使用新鲜配制的本产品。6)在进行D-荧光素钾盐的溶解时,应使用无钙镁离子的DPBS,因钙镁离子可能会抑制荧光素酶的活性,此外镁离子可能会对荧光素的氧化造成影响,从而影响检测。7)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。8)本产品只作科研用途!荧光素酶(Luciferase)是自然界中能够催化荧光素产生生物发光的酶的统称,其中更有代表性的是来自萤火虫体内(Fire?y)和海肾(Renilla)体内的两类萤光素酶,分别命名为F-Luciferase和R-Luciferase,同时近年来研究得较多的来源于高斯氏菌的高斯荧光素酶(Gaussluciferase)。荧光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin,在luciferin氧化的过程中,会发出生物荧光(bioluminescence),可通过荧光测定仪设备测定luciferin氧化过程中释放的生物荧光,常应用于启动子转录活性调控及miRNA靶基因验证等方向研究。萤火虫萤光素酶更通用和更常见的报告基因是北美萤火虫photinuspyralis的荧光素酶,该蛋白质不需要翻译后修饰即可获得酶活性。高浓度(体内)甚至没有毒性,可用于原核和真核细胞。运输和保存运输条件:4℃冰袋运输。D-荧光素钾盐的测试方法有哪几种?常州D-荧光素钾盐保质期
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后者能够易溶于水或缓冲液中,使用方便,溶剂无毒性,特别适合体内实验。配成溶液后的这三种产品,在绝大多数的应用上都没有实质性的差别。产品性质运输和保存运输条件:4℃冰袋运输;短期保存:4℃干燥避光长期保存:-20℃干燥避光母液保存:-20℃避光有效期长期保存:有效期一年工作液:先用现配使用方法1.体外生物发光检测1)用无菌蒸馏水溶解D-荧光素钾盐,配制成30mg/mL的储存液(100-200×),混匀。立即使用,或分装于-20℃避光保存,避免反复冻融。2)用预热好的组织培养基将储存液稀释至mg/mL的工作液浓度。3)去除细胞培养基。4)待图像分析前,向细胞内添加荧光素工作液,37℃孵育5-10min,然后进行图像分析。2.***成像分析1)用无菌的DPBS(w/oMg2+、Ca2+)配制15mg/mL的荧光素的储存液,混匀。2)用μm滤膜过滤除菌。立即使用,或分装于-20℃避光保存,避免反复冻融。3)腹腔注射(.),按照150mg/kg的荧光素/体重浓度进行注射,以小鼠为例,每只小鼠体重假定20g,每只小鼠用量3mg;4)注射入体内10-15min(待光信号达到更强稳定平台期)后进行成像分析。注:建议对每只动物模型都需要建立荧光素酶动力学曲线,从而确定更高信号检测时间和信号平台期。 宿迁专业做D-荧光素钾盐使用说明