请穿实验服并戴一次性手套操作。8)本产品只作科研用途!D-荧光素钾盐是荧光素酶的水溶性底物,存在于多种发光生物体中。在ATP和荧光素酶的催化作用下,D-荧光素钾被氧化,产生蓝绿色的光(560nm),当底物过量时,产生的Chemicalbook光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关。编码荧光素酶的Luc基因是植物、哺乳动物细胞的常用报告基因。由于没有背景干扰,因此可以很容易地检测出低至。用途D-荧光素钾盐是一类在生物体中发现的能引起生物发光的杂环化合物,如萤火虫。在ATP存在下,萤光素酶将其氧化脱羧后会发光。化学研究中可用于荧光素酶的基板。生物活性D-Luciferin是萤火虫荧光素酶的底物。体外研究D-luciferinisthenaturalsubstrateoftheenzymeluciferase(Luc),μM.体内研究Bioluminescenceimaging(BLI)usingthefireflyluciferase(Fluc)(5,10,15,and20min)μLofD-luciferin(intraperitoneallyorintravenously)stocksolutionpergramofbodyweight:normally~200μLfora20gmouseforastandard150mg/(eitherPotassiumorSodiumSalt)atroomtemperatureanddissolveindPBS。做D-荧光素钾盐测试价格是多少。扬州专业做D-荧光素钾盐公司
室温培育30min后加入细胞孔板中,置于培养箱常规培养。2)单克隆细胞筛选转染24h后胰酶消化细胞并按1∶6比例接种到新6孔板中,同时加入实验确定的浓度G418,随后每2d更换一次培养基并维持G418筛选直至单细胞抗性克隆的出现。分别挑选单一抗性克隆至96孔板,待其逐渐增殖后转入24孔板中继续传代培养。3)荧光素酶活性鉴定阳性克隆单一抗性克隆传代至第五代时用LuciferaseAs-sayAystem检测荧光素酶活性。检测时,各克隆按1×105个/孔接种到24孔板,24h后细胞裂解液裂解12000rpm,4℃离心10min,收集裂解物,取上清10μl加入96孔白板中,向每孔加入50μl荧光素酶96microplateluminometer连续读底物,停留2s后,取10s的荧光值(RLU),每个克隆设3个复孔,保留RLU值高的细胞克隆继续传代培养,再过5代后进行荧光素酶活性检测。保留RLU值维持较高的克隆直至第30代,荧光素酶活性更高的几个克隆MCF-7-luc即为阳性克隆.各不同数量细胞克隆的荧光值检测7-luc阳性克隆细胞按细胞数将筛出的MCF-4×104、2×104、1×104、5000、2500、1250、625、312和156分别接种到96孔黑板中,另外一组只有细胞,一组只有培养基作对照,设置2个复孔,常规培去上清并用PBS洗两次。南京荧光素酶D-荧光素钾盐溶液怎么保存D-荧光素钾盐如何选择合作公司?
D-荧光素钾盐是一种化学品。中文别名:(S)-4,5-二氢-2-(6-羟基苯并噻唑-2-基)噻唑-4-甲酸钾盐英文别名:(S)-4,5-Dihydro-2-(6-hydroxybenzothiazol-2-yl)thiazole-4-carboxylicacidpotassiumsalt产品描述D-荧光素(D-Luciferin)是荧光素酶(Luciferase)的常用底物,普遍应用于整个生物技术领域,特别是体内活题成像技术。其作用机制是在ATP和荧光素酶的作用下,荧光素底物能够被氧化发光。当荧光素过量时,产生的光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关性(见下图)。将携带荧光素酶编码基因(Luc)的慢病毒转染入细胞后构建稳定表达细胞株,构建原位肿大的瘤模型,之后注入荧光素底物,通过IVIS系统来检测光强度变化,从而实时监测疾病发展状态或进行药物药效评价等。也可以利用ATP对此反应体系的影响,根据生物发光强度的变化来指示能量或生命体征。注:在抗肿大的瘤药物药效评价试验中,由于生物自发光检测需要根据荧光素表达标定肿大的瘤大小,受肿大的瘤生长所发生的肿大的瘤内部坏死影响,生物自发光并不能很覆盖面广的评价肿大的瘤生长,在抗肿大的瘤药效评价有较高要求的实验中,建议使用小动物核磁成像系统检测肿大的瘤生长。D-荧光素也常用于体外研究。
并实现了在非常高通量的应用中使用报告基因检测。[1]随着UltraGlo?萤光素酶的发展,现在已经实现了“加样-读数”的ATP检测方法。ATP是细胞健康的重要指标,这使得CellTiter-Glo?能有效测定细胞活力,尤其是在高通量应用中。该检测原理还促进了其它ATP检测平台的诞生,尤其是用于研究ATP酶(如激酶)的Kinase-Glo?(2004年)和ADP-Glo?(2009年)酶检测系统。[1]2003Caspase-Glo?3/7检测除了可以利用萤火虫萤光素酶反应测定样品中萤光素酶或ATP的含量外,还可以检测底物(luciferin)浓度的变化。通过将luciferin与可被不同酶类识别并产生反应的保护基团偶联,能对这些酶进行灵敏的“加样-读数”检测,如半胱天冬酶(caspase)和其它蛋白酶。[1]2007One-Glo?萤光素酶检测系统随着对萤火虫萤光素酶化学反应的进一步了解以及Promega生物学家和化学家团队的建立,一种改进的luciferin面世,能更好地用于典型的报告基因检测应用。这种新的底物——fluoroluciferin,是新型底物开发的一个早期实例。[1]2012NanoLuc?萤光素酶基于定向进化和新型底物开发方面的经验,研究人员从虾的萤光素酶改造设计出一种新型萤光素酶报告基因,即NanoLuc?萤光素酶。D-荧光素有时候也叫游离酸。
tetrametrylrhodarnineisothiocyante,TRITC)是一种紫红色粉末,较稳定,是罗达明(rhodamine)的衍生物。更大吸收光谱550urn,更大发射光谱620urn呈橙红色荧光,与FITC发射的黄绿色荧光对比鲜明,常用于双标记染色。按照抗原抗体反应的结合步聚,免疫荧光法可分为以下三种。1.直接法用荧光素标记的特异性抗体直接与相应的抗原结合,以检查出相应的抗原成分。2.间接法先用特异性抗体与相应的抗原结合,洗去未结合的抗体,再用荧光素标记的抗特异性抗体(间接荧光抗体)与特异性抗体相结合,形成抗原一特异性抗体一间接荧光抗体的复合物。在此复合物上带有比直接法更多的荧光抗体,所以,此法较直接法灵敏。3.补体法用特异性的抗体和补体的混合液与标本上的抗原反应,补体就结合在抗原抗体复合物上,再用抗补体的荧光抗体与之相结合,就形成了抗原一抗体一补体一抗补体荧光抗体的复合物。荧光显微镜下所见到的发出荧光的部分即是抗原所在的部位。补体法具有敏感性强的优势,同时适用于各种不同种属来源的特异性抗体的标记显示,在各种不同种属动物抗体的检测上为更常用的技术方法荧光素酶(英文名称:Luciferase)是自然界中能够产生生物荧光的酶的统称。D-荧光素钾盐检测的安全性如何保障?宿迁游离酸D-荧光素钾盐溶液怎么保存
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而是对于所有能够产生萤光的底物和其对应的酶的统称,虽然它们各不相同。不同的能够控制发光的生物体用不同的萤光素酶来催化不同的发光反应。**为人所知的发光生物是萤火虫,而其所采用不同的萤光素酶与其他发光生物如荧光菇(发光类脐菇,Omphalotusolearius)或许多海洋生物都不相同。在萤火虫中,发光反应所需的氧气是从被称为腹部气管(abdominaltrachea)的管道中输入。一些生物,如叩头虫,含有多种不同的萤光素酶,能够催化同一萤光素底物,而发出不同颜色的萤光。萤火虫有2000多种,而叩甲总科(包括萤火虫、叩头虫和相关昆虫)则有更多,因此它们的萤光素酶对于分子系统学研究很有用。如今研究得**透彻的萤光素酶是来自Photinini族萤火虫中的北美萤火虫(Photinuspyralis)。[1]萤光素酶可以在实验室中用基因工程的方法生成,并被用于多种不同的实验。萤光素酶的基因可以被合成并插入到生物体中或转染到细胞中。研究者利用基因工程已经使得小鼠、家蚕、马铃薯等一些生物可以合成萤光素酶。间接体外成像是一种强大的研究手段,可以对整个动物体中的细胞群落进行分析:将不同类型的细胞(骨髓干细胞、T细胞等)标记上(即表达)萤光素酶。扬州专业做D-荧光素钾盐公司
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