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徐州荧光素钾盐D-荧光素钾盐试剂

来源: 发布时间:2022-06-14

    而是对于所有能够产生萤光的底物和其对应的酶的统称,虽然它们各不相同。不同的能够控制发光的生物体用不同的萤光素酶来催化不同的发光反应。**为人所知的发光生物是萤火虫,而其所采用不同的萤光素酶与其他发光生物如荧光菇(发光类脐菇,Omphalotusolearius)或许多海洋生物都不相同。在萤火虫中,发光反应所需的氧气是从被称为腹部气管(abdominaltrachea)的管道中输入。一些生物,如叩头虫,含有多种不同的萤光素酶,能够催化同一萤光素底物,而发出不同颜色的萤光。萤火虫有2000多种,而叩甲总科(包括萤火虫、叩头虫和相关昆虫)则有更多,因此它们的萤光素酶对于分子系统学研究很有用。如今研究得**透彻的萤光素酶是来自Photinini族萤火虫中的北美萤火虫(Photinuspyralis)。[1]萤光素酶可以在实验室中用基因工程的方法生成,并被用于多种不同的实验。萤光素酶的基因可以被合成并插入到生物体中或转染到细胞中。研究者利用基因工程已经使得小鼠、家蚕、马铃薯等一些生物可以合成萤光素酶。间接体外成像是一种强大的研究手段,可以对整个动物体中的细胞群落进行分析:将不同类型的细胞(骨髓干细胞、T细胞等)标记上(即表达)萤光素酶。D-荧光素有时候也叫游离酸。徐州荧光素钾盐D-荧光素钾盐试剂

    具体实验流程:注:该操作流程通常用来检测转染了萤火虫荧光素酶基因的真核细胞中荧光素酶表达的活性,不适用于对细菌荧光素酶进行检测。1.实验***天,消化并接种细胞(根据具体实验选择合适的细胞)于35mm细胞培养皿,置于5%CO2、饱和湿度的37℃培养箱内培养过夜。2.等细胞密度达到70%时用Luciferase报告基因质粒、LacZ的表达质粒及其它质粒(根据具体实验确定)共转染细胞(根据具体实验选择转染方法,如磷酸钙沉淀法、PEI、lipofectamine2000等均可)。3.转染24-36h后,吸取培养液,用预冷的PBS(无钙和镁离子)洗涤细胞。注:荧光酶的酶促反应会被痕量的钙所抑制,故用磷酸钙转染的细胞在收集细胞前应充分洗涤除去含钙介质。4.在每个培养皿中加入350μl预冷的harvestbuffer,于4℃或冰上放置10min裂解细胞。5.在细胞裂解期间,准备足量的ml微量离心管,将ATPbuffer与luciferinbuffer以1:,每管100μl。6.依次取等体积的细胞裂解液(100μl)至步骤5中的离心管中,迅速混匀,在发光仪(Luminometer)上读取吸光值。注:发光反应会迅速衰减,将细胞裂解液加入反应液后5s内必须读取吸光值。7.确保以相同操作手法读取全部样品吸光值后。扬州体外研究D-荧光素钾盐保质期D-荧光素钾盐使用的注意事项。

    短期保存:4℃干燥避光长期保存:-20℃干燥避光母液保存:-20℃避光有效期长期保存:有效期一年工作液:先用现配使用方法1.体外生物发光检测1)用无菌蒸馏水溶解D-荧光素钾盐,配制成30mg/mL的储存液(100-200×),混匀。立即使用,或分装于-20℃避光保存,避免反复冻融。2)用预热好的组织培养基将储存液稀释至mg/mL的工作液浓度。3)去除细胞培养基。作者:思存链接:zhuanlan./p/来源:知乎著作权归作者所有。商业转载请联系作者获得授权,非商业转载请注明出处。高斯荧光素酶近年来,其他荧光素酶(例如高斯荧光素酶)的使用有所增加,因为这些报告基因较小,并且不需要ATP的存在。高斯荧光素酶是一种20kD的蛋白质,可通过氧气催化腔肠素氧化,产生光。来自于海洋足类高斯氏菌的生物发光酶在表达后可有效地从哺乳动物细胞中分泌出来。Amplite?高斯荧光素酶报告基因检测试剂盒(#AAT-12530)使用专有的发光配方来定量细胞培养基中的荧光素酶活性。当该试剂与高斯荧光素酶相互作用时,产sheng发光产物,该发光产物提供强发光。Amplite高斯荧光素酶报告基因测定试剂盒特点:提供了与HTS液体处理仪器兼容的所有基本组件它们具有高灵敏度。

    Q:荧光素酶作为报告基因相比于荧光蛋白有哪些优势?Luciferase的灵敏度相比于GFP提高10-100倍以上,同时具有更宽的动态范围,便于数值分析比较,不需要荧光显微镜,而且在***实验中其荧光穿透性高于EGFP等荧光蛋白,同时由于没有内源活性、其本底信号很低。而GFP等荧光蛋白相比于荧光素酶的优势在于可以进行失踪定位,并且其观测不需裂解细胞,方便进行适时观察。Q:海肾荧光素酶和萤火虫荧光素酶相比,相对活性如何?在氧、镁和ATP的存在下,萤火虫荧光素酶作用于甲虫荧光素,而来源于海洋腔肠(Renillareniformis)的荧光素酶在氧的存在下作用于海肾荧光素。双报告基因技术(Dual-reporterassays),结合了萤火虫荧光素酶测试和海肾荧光素酶测试。Q:双荧光素酶报告基因实验转染效率很低而且复孔重复不出来是什么原因?转染效率低的话可以从三个方面改善,首先要确保细胞状态是好的,通常我们选出处于分裂期的细胞,另外阳性对照您可以选择过表达的荧光蛋白质粒,还有就是DNA的质量尤为重要,更好是先酶切验证。这个实验检测结果很灵敏,有一定差异是正常的,通常只要确保它在一个数量级之内即可。如果差异超出这个范围可以从两方面改善,一是记住保持样本的均一性。南京翌科生物科技有限公司D-荧光素钾盐比较靠谱。

    luciferin)的分子结构如右图所示:,在氧气、ATP存在的条件下和荧光素酶发生反应,生成氧化荧光素(oxyluciferin),分子结构如右图所示,并产生长发生光现象。但是该底物荧光素以前大多依赖进口,产品价格昂贵。而且由于该产品容易降解、受潮影响使用效果。所以,需要国产化的方式生产,一方面可以降低成本,一方面可以增强使用效果。作者:科远迪链接:zhuanlan./p/来源:知乎著作权归作者所有。商业转载请联系作者获得授权,非商业转载请注明出处。D-luciferin,potassiumsalt荧光素产品说明书发光原理哺乳动物生物发光,一般是将Fireflyluciferase基因(由554个氨基酸构成,约50KD)即荧光素酶基因整合到预期观察的细胞染色体DNA上以表达荧光素酶,培养出能稳定表达荧光素酶的细胞株,当细胞分裂、转移、分化时,荧光素酶也会得到持续稳定的表达。基因、细胞和活题动物都可被荧光素酶基因标记。将标记好的细胞接种到实验动物体内后,当外源(腹腔或静脉注射)给予其底物荧光素(D-luciferin,potassiumsalt,以下均简称荧光素),即可在几分钟内产生长发生光现象。所发的光波长在540-600nm。这种酶在ATP,氧存在的条件下,催化荧光素的氧化反应才可以发光。D-荧光素钾盐测试适用范围包括哪些?连云港体外研究D-荧光素钾盐生物公司

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    从而实时监测疾病发展状态或药物的***功效等。也可以利用ATP对此反应体系的影响,根据生物发光强度的变化来指示能量或生命体征。,PotassiumSalt/D-荧光素钾盐分子式:NaC11H7N2O3S2·H2O分子量:g/mol纯度:高级纯()应用:1)活细胞、组织或生物体内luc标记基因和荧光素酶-融合基因体内/体外表达的成像分析;2)***用于报告基因分析,免疫分析和ATP荧光卫生监测分析;Protocol1:InVitroBioluminescentAssays/体外生物发光检测1)配制成100mM的储存液(200×,浓度30mg/ml)。混匀后立即使用或分装后-20℃冻存。2)用预热好的组织培养基1∶200稀释储存液,配制工作液(终浓度150μg/mL)。3)去除培养细胞的培养基直至无残留。4)图像分析前立即向细胞内添加1×荧光素工作液,然后进行图像分析(或者细胞放在37℃短时间孵育后检测可增强信号)。D-荧光素钾盐注:萤光素、萤光素酶、萤火虫萤光素酶、萤光素钾盐、萤光素钾盐盐也经常被称作荧光素、荧光素酶、萤火虫荧光素酶、荧光素钾盐、荧光素钠盐。Protocol2:Invivoanalysisinmice/小鼠***成像分析1)用无菌的DPBS(w/oMg2+、Ca2+)配制D-荧光素钾盐溶液(15mg/mL),。一旦使用,保持冰冷且避光。徐州荧光素钾盐D-荧光素钾盐试剂

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