通过开发新的方法来改变萤火虫萤光素酶检测的信号动力学,例如Bright-Glo?、Steady-Glo?和Dual-Glo?允许使用微孔板进行检测。而“加样-读数”的形式简化了样品处理,并实现了在非常高通量的应用中使用报告基因检测。[1]随着UltraGlo?萤光素酶的发展,现在已经实现了“加样-读数”的ATP检测方法。ATP是细胞健康的重要指标,这使得CellTiter-Glo?能有效测定细胞活力,尤其是在高通量应用中。该检测原理还促进了其它ATP检测平台的诞生,尤其是用于研究ATP酶(如激酶)的Kinase-Glo?(2004年)和ADP-Glo?(2009年)酶检测系统。[1]2003Caspase-Glo?3/7检测除了可以利用萤火虫萤光素酶反应测定样品中萤光素酶或ATP的含量外,还可以检测底物(luciferin)浓度的变化。通过将luciferin与可被不同酶类识别并产生反应的保护基团偶联,能对这些酶进行灵敏的“加样-读数”检测,如半胱天冬酶(caspase)和其它蛋白酶。[1]2007One-Glo?萤光素酶检测系统随着对萤火虫萤光素酶化学反应的进一步了解以及Promega生物学家和化学家团队的建立,一种改进的luciferin面世,能更好地用于典型的报告基因检测应用。这种新的底物——fluoroluciferin。D-荧光素钾盐测试适用范围包括哪些?盐城游离酸D-荧光素钾盐活题成像
荧光素酶(Luciferase)是自然界中能够催化荧光素产生生物发光的酶的统称,其中**有7a70d2e3-5dda-4f49-84be-c6的是来自萤火虫体内(Fire?y)和海肾(Renilla)体内的两类萤光素酶,分别命名为F-Luciferase和R-Luciferase,同时近年来研究得较多的来源于高斯氏菌的高斯荧光素酶(Gaussluciferase)。荧光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin,在luciferin氧化的过程中,会发出生物荧光(bioluminescence),可通过荧光测定仪设备测定luciferin氧化过程中释放的生物荧光,常应用于启动子转录活性调控及miRNA靶基因验证等方向研究。萤火虫萤光素酶**通用和**常见的报告基因是北美萤火虫photinuspyralis的荧光素酶,该蛋白质不需要翻译后修饰即可获得酶活性。高浓度(体内)甚至没有毒性,可用于原核和真核细胞。Amplite?萤光素酶报告基因检测试剂盒(12518)使用无DTT**配方来定量活细胞和细胞提取物中的萤光素酶活性。该测定基于萤火虫荧光素酶,萤火虫荧光素酶是一种单体的61kD酶,可催化荧光素的两步氧化,在560nm处产生光。Amplite?萤光素酶报告基因检测试剂盒特点:具有优化的“混合读取”测定规程,可与HTS液体处理仪器兼容具有高灵敏度。南通专业做D-荧光素钾盐试剂南京D-荧光素钾盐测试公司有哪几家。
luciferyladenylate)+PPi萤光素化腺苷酸+O2→氧荧光素+AMP+光这一反应非常节省能量,几乎所有输入反应的能量都被转化为光。与之形成鲜明对比的是人类使用的白炽灯,只有越10%的能量被转化为光,剩余的能量都变为热能而被浪费。分析荧光素或荧光素酶不是特定的分子,而是对于所有能够产生荧光的底物和其对应的酶的统称,虽然它们各不相同。不同的能够控制发光的生物体用不同的荧光素酶来催化不同的发光反应。更为人所知的发光生物是萤火虫,而其所采用不同的荧光素酶与其他发光生物如荧光菇(发光类脐菇,Omphalotusoleariu')或许多海洋生物都不相同。在萤火虫中,发光反应所需的氧气是从被称为腹部气管(abdominaltrachea)的管道中输入。一些生物,如叩头虫,含有多种不同的荧光素酶,能够催化同一荧光素底物,而发出不同颜色的荧光。萤火虫有2000多种,而叩甲总科(包括萤火虫、叩头虫和相关昆虫)则有更多,因此它们的荧光素酶对于分子系统学研究很有用。目前研究得更透彻的荧光素酶是来自Photinini族萤火虫中的北美萤火虫(Photinuspyrali')。应用荧光素酶可以在实验室中用基因工程的方法生成,并被用于多种不同的实验。
在食品卫生领域由于ATP生物发光技术无需培养过程,操作简便、灵敏度高,数分钟内可得到结果,具有其它微生物检测方法无法比拟的优势,是目前检测微生物更快的方法。荧光素是更受欢迎的多功能生物荧光底物之一。在萤火虫和几种其它甲虫中发现了萤火虫荧光酶/荧光素。通过中间体dioxetanone介导作用,荧光素酶氧化ATPji活的荧光素。萤火虫荧光素酶在ATP的辅助下氧化荧光素产生荧光。这个反应发生的几秒内在560nm处的化学荧光达到更高峰,当荧光素和ATP都超量存在的条件下,发射光与荧光素酶的活性成比例关系。萤火虫荧光素酶很早以前就用于与抗体结合形成偶联物,作为免疫分析中用荧光素作为底物进行检测的标签。与HRP和碱性磷酸酶相比,荧光素酶不耐化学修饰。这个酶的一个特殊的优点是,除了高灵敏度外,在哺乳动物组织中内源性荧光素酶的活性很低。荧光素酶另一个重要的作用是用于卫生监测。荧光素酶/荧光素系统可用于检测污染,因为产生荧光所需的ATP存在于所以活ti生物中。这种类型的ATP生物荧光特性足以保证对食品表面的检测,无论是在加工制作工程中设备的污染还是产品的污染都能检出。D-荧光素(D-Luciferin)是荧光素酶(Luciferase)的常用底物。D-荧光素钾盐测试方法是体外生物发光检测。
从而实时监测疾病发展状态或药物的***功效等。也可以利用ATP对此反应体系的影响,根据生物发光强度的变化来指示能量或生命体征。,PotassiumSalt/D-荧光素钾盐分子式:NaC11H7N2O3S2·H2O分子量:g/mol纯度:高级纯()应用:1)活细胞、组织或生物体内luc标记基因和荧光素酶-融合基因体内/体外表达的成像分析;2)***用于报告基因分析,免疫分析和ATP荧光卫生监测分析;Protocol1:InVitroBioluminescentAssays/体外生物发光检测1)配制成100mM的储存液(200×,浓度30mg/ml)。混匀后立即使用或分装后-20℃冻存。2)用预热好的组织培养基1∶200稀释储存液,配制工作液(终浓度150μg/mL)。3)去除培养细胞的培养基直至无残留。4)图像分析前立即向细胞内添加1×荧光素工作液,然后进行图像分析(或者细胞放在37℃短时间孵育后检测可增强信号)。D-荧光素钾盐注:萤光素、萤光素酶、萤火虫萤光素酶、萤光素钾盐、萤光素钾盐盐也经常被称作荧光素、荧光素酶、萤火虫荧光素酶、荧光素钾盐、荧光素钠盐。Protocol2:Invivoanalysisinmice/小鼠***成像分析1)用无菌的DPBS(w/oMg2+、Ca2+)配制D-荧光素钾盐溶液(15mg/mL),。一旦使用,保持冰冷且避光。D-荧光素也常用于身体的外部研究。萤火虫荧光素酶D-荧光素钾盐活题成像原理
D-荧光素盐也算是钠盐和钾盐。盐城游离酸D-荧光素钾盐活题成像
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