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扬州荧光素酶编码基因D-荧光素钾盐

来源: 发布时间:2022-05-28

    4)待图像分析前,向细胞内添加荧光素工作液,37℃孵育5-10min,然后进行图像分析。2.活ti成像分析1)用无菌的DPBS(w/oMg2+、Ca2+)配制15mg/mL的荧光素的储存液,混匀。2)用μm滤膜过滤除菌。立即使用,或分装于-20℃避光保存,避免反复冻融。3)腹腔注射(.),按照150mg/kg的荧光素/体重浓度进行注射,以小鼠为例,每只小鼠体重假定20g,每只小鼠用量3mg;4)注射入体内10-15min(待光信号达到更强稳定平台期)后进行成像分析。注:建议对每只动物模型都需要建立荧光素酶动力学曲线,从而确定更高信号检测时间和信号平台期。注意事项1)本品(fireflyluciferin)和甲虫荧光素(beetleluciferin)、萤光素钾盐只是不同别名,以CAS号115144-35-9为准。2)注射方式、动物类型以及体重等都会影响信号的发射,因此建议每次实验都要做荧光素酶动力学曲线,确定更佳信号平台期和更佳的检测时间。3)如果要进行ATP的检测,尽量避免外源ATP的污染,如操作时戴手套并使用ATP-free的实验耗材,在进行荧光素的溶解时应使用ATP-free无菌水。4)为避免反复冻融,本产品配制成溶液后建议适当分装后-20℃或-80℃保存。为防止氧化,如有条件,可以对储存液充氮气或氩气后保存。D-荧光素钾盐如何选择合作公司?扬州荧光素酶编码基因D-荧光素钾盐

    可用荧光素酶检测系统灵敏方便地测定荧光素酶基因的表达。荧光素酶报告基因有许多优点:①非放射性;②比CAT及其他报告基因速度快;③比CAT灵敏100倍;④荧光素酶在哺乳细胞中的半衰期为3小时,在植物中的半衰期为3.5小时。由于半衰期短,故启动子的改变会即时导致荧光素酶活性的改变,而荧光素酶不会积累。相反,CAT在哺乳细胞中的半衰期为50小时。荧光素酶浓度在10—16mol/L(10pS/L)到10-8mol/L(1mg/L)范围内,荧光信号强度与酶浓度成正比。在理想条件下,可检测到l0-20mol/L的荧光素酶。检测步骤:1.用生物信息学方法分析并预测启动子区可能的转录因子结合位点。2.设计引物用PCR法从基因组DNA中克隆所需的靶启动子片段,将此片段插入到荧光素酶报告基因质粒(pGL3-basic)中。3.筛选阳性克隆,测序。扩增克隆并提纯质粒备用。4.扩增转录因子质粒,提纯备用。同时准备相应的空载质粒对照,提纯备用。5.培养293(或其它目的细胞),并接种于24孔板中,生长10-24小时(80%汇合度)。6.将报告基因质粒与转录因子表达质粒共转染细胞。7.提取蛋白并用于荧光素酶检测。8.加入底物,测定荧光素酶的活性。9.计算相对荧光强度,并与空载对照比较。羟基丁酸试剂盒D-荧光素钾盐使用的是什么技术?

    室温培育30min后加入细胞孔板中,置于培养箱常规培养。2)单克隆细胞筛选转染24h后胰酶消化细胞并按1∶6比例接种到新6孔板中,同时加入实验确定的浓度G418,随后每2d更换一次培养基并维持G418筛选直至单细胞抗性克隆的出现。分别挑选单一抗性克隆至96孔板,待其逐渐增殖后转入24孔板中继续传代培养。3)荧光素酶活性鉴定阳性克隆单一抗性克隆传代至第五代时用LuciferaseAs-sayAystem检测荧光素酶活性。检测时,各克隆按1×105个/孔接种到24孔板,24h后细胞裂解液裂解12000rpm,4℃离心10min,收集裂解物,取上清10μl加入96孔白板中,向每孔加入50μl荧光素酶96microplateluminometer连续读底物,停留2s后,取10s的荧光值(RLU),每个克隆设3个复孔,保留RLU值高的细胞克隆继续传代培养,再过5代后进行荧光素酶活性检测。保留RLU值维持较高的克隆直至第30代,荧光素酶活性更高的几个克隆MCF-7-luc即为阳性克隆.各不同数量细胞克隆的荧光值检测7-luc阳性克隆细胞按细胞数将筛出的MCF-4×104、2×104、1×104、5000、2500、1250、625、312和156分别接种到96孔黑板中,另外一组只有细胞,一组只有培养基作对照,设置2个复孔,常规培去上清并用PBS洗两次。

    附录ⅧB),与标准硫酸钾溶液制成的对照液比较,不得更浓()。干燥失重取本品,在105℃干燥至恒重,减失重量不得过%(附录ⅧL)。锌盐取本品,加氯化钠的饱和水溶液10ml溶解后,加稀盐酸2ml,摇匀,滤过,滤液中加亚铁**钾试液1ml,不得发生浑浊。5鉴别方法编辑(1)取本品的水溶液(1→2000)1滴,点于滤纸上,即生成黄色斑点,趁湿置溴蒸气中,1分钟后再使与氨蒸气接触,斑点即变为深粉红色。(2)本品的水溶液显强烈的荧光,用大量的水稀释后仍极明显;但加酸使成酸性后,荧光即消失;再加碱使成碱性,荧光又显出。(3)本品炽灼灰化后显钠盐的鉴别反应(附录Ⅲ)。6含量测定编辑取本品约,精密称定,加水20ml溶解后,加稀盐酸5ml使荧光素析出,用丁醇-氯仿(1:1)提取4次,每次20ml,合并提取液,用水10ml洗涤,洗液再用异丁醇-氯仿(1:1)5ml振摇提取,合并提取液,置105℃恒重的容器中,在水浴上通风蒸发至干,残渣用乙醇10ml溶解后,再置水浴上蒸干,并在105℃干燥至恒重,精密称定,残渣重量与相乘,即得供试量中含有C20H10Na2O5的重量。荧光素钠是一种有机化合物,分子式为C20H10Na2O5,橙红色粉末,无气味,有吸湿性;易溶于水,溶液呈黄红色,并带极强的黄绿色荧光。南京靠谱的D-荧光素钾盐测试公司。

    重组为一个明亮的萤光素酶。这些亚基的亲和力可以和SmBiT肽一样低,从而可以进行蛋白质相互作用的测定;也可以和HiBiT一样高,从而允许自我组装。[1]2017HiBiT?技术基于NanoBiT?系统的研究,我们将与LgBiT具有极强亲和作用的。HiBiT作为一种易于检测且具有高灵敏度的蛋白质标签,具有多种功能,例如当与基于CRIPSR的标签一起使用时,可以创建内源性报告基因模型。[1]2020Lumit?技术随着NanoBiT?技术的发展,人们认识到可以利用该系统通过结合免疫测定的组分检测多种分析物。由此产生的平台(现称为“Lumit”)提供了具有高灵敏度的简化免疫检测法。荧光素酶(英文名称:Luciferase)是自然界中能够产生生物荧光的酶的统称,其中更有代表性的是一种学名为Photinuspyrali'的萤火虫体内的荧光素酶。在相应化学反应中,荧光的产生是来自于萤光素的氧化,有些情况下反应体系中也包括三磷酸腺苷(ATP)。没有荧光素酶的情况下,萤光素与氧气反应的速率非常慢,而钙离子的存在常常可以进一步加速反应(与肌肉收缩的情况相似)。荧光生成反应通常分为以下两步:萤光素+ATP→萤光素化腺苷酸。D-荧光素钾盐测试怎么样?罗丹明b-聚乙二醇-生物素

光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关性。扬州荧光素酶编码基因D-荧光素钾盐

    经HE染色后观察细胞的病理形态学。活题动物成像技术是近期发展起来的一种新型稳定可靠,是检测动物体内分子及细胞事件的影像检测技术,强有力手段。利用生物发光成像(BLI)可以对活题病灶的大小进行无损伤直观准确检测。我们有自己的独自有机合成实验室,可以生产合成各种化学发光试剂,我们可以提供化学发光试剂、化学发光底物、发光标记物、发光增强剂、染料探针类、微生物和酶的显色底物以及体外诊断试剂。相关列表鲁米诺/3-氨基苯二甲酰肼/发光氨异鲁米诺/4-氨基邻苯二甲酰肼吖啶酯DMAE-NHS吖啶酰肼NSP-SA-ADH吖啶酯ME-DMAE-NHS哌嗪-N,N'-二(2-乙磺酸)PIPES磷酸烯醇丙的酮酸三(环已胺)盐PEP0c835bf4-aae2-43c1-be81-e57液肝素锂乙二胺四乙酸二钾/EDTA二钾血清分离胶/血液分离胶肝素抗凝剂乙二胺四乙酸三钾/EDTA三钾血液促凝剂高效促凝粉高效硅化剂水溶性硅化剂草酸钾钙离子螫合抗凝剂弱效抗凝剂吖啶酯己二酰阱NSP-DMAE-ADH吖啶酯-T4结合物吖啶酯-T3结合物吖啶磺酰胺盐-N-乙胺基马来酰亚胺吖啶磺酰胺盐-T4结合物吖啶磺酰胺盐-T3结合物生物素-T4结合物化学发光分析试剂及标记物生物素-T3结合物生物素-NHS活性酯吖啶磺酰胺NSP-SA-ADH吖啶酯NSP-DMOAE-NHS吖啶酯NSP-DMOAE-PE。扬州荧光素酶编码基因D-荧光素钾盐

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