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苏州荧光素钾盐D-荧光素钾盐

来源: 发布时间:2022-05-23

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    SodiumSalt/D荧光素钠盐分子式:NaC11H7N2O3S2·H2O分子量:g/mol纯度:高级纯()应用:1)体外化学发光分析(invitro);2)***成像实验(invivo);3)高灵敏度ATP分析;步骤:Protocol1:InVitroBioluminescentAssays/体外生物发光检测1)用mL蒸馏水溶解gD-荧光素钠盐,配制成100mM的储存液(200×,浓度30mg/ml)。混匀后立即使用或分装后-20℃冻存。2)用组织培养基1∶200稀释储存液,配置工作液(终浓度150μg/mL)。3)去除培养细胞的培养基。4)待图像分析前,向细胞内添加1×荧光素工作液,然后进行图像分析。Protocol2:Invivoanalysis/***成像分析1)用无菌的PBS(w/oMg2+、Ca2+)配制D-荧光素钠盐工作液(15mg/mL),。一旦使用,保持冰冷且避光。D-荧光素(D-Luciferin)是荧光素酶(Luciferase)的常用底物,普遍应用于整个生物技术领域,尤其是体内***成像技术。其作用机制是在ATP和荧光素酶的作用下,荧光素(底物)能够被氧化发光(见下图)。当荧光素过量时,产生的光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关性。将携带荧光素酶编码基因(Luc)的质粒转染入细胞后,导入研究动物如大、小鼠体内,之后注入荧光素,通过生物发光成像技术(BLI)来检测光强度变化。宿迁专业做D-荧光素钾盐做D-荧光素钾盐测试品牌有哪些?

    是新型底物开发的一个早期实例。[1]2012NanoLuc?萤光素酶基于定向进化和新型底物开发方面的经验,研究人员从虾的萤光素酶改造设计出一种新型萤光素酶报告基因,即NanoLuc?萤光素酶。这是一种小分子(19kDa)单体酶,具有独特的底物,其灵敏度比已具备高灵敏度的萤火虫或海肾萤光素酶系统高约100倍。这种新型的报告基因有着范围广的应用前景,为进一步的技术开发奠定了基础。[1]2015NanoBRET?技术NanoLuc?的小体积和非常明亮的光输出是作为蛋白质标签的理想特征。这些特征还很适合作为生物发光共振能量转移(BRET)的供体。一项针对各种能量受体荧光基团的深入研究发现,红色光谱中的可选择性有助于消除与BRET测定相关的一些挑战。可将这些荧光基团添加到蛋白质配基等分子中以测量靶蛋白的结合,或与HaloTag?配基耦联以进行活细胞中蛋白质:蛋白质相互作用的检测。[1]2016NanoBiT?技术随着NanoLuc?的诞生,Promega的科学家努力将该报告基因改造为多亚基系统,即“NanoLuc?BinaryTechnology”或NanoBiT?。该系统由两部分组成:11个氨基酸的小标签和一个更大,更精细的NanoLuc?亚基,LgBiT。这两部分结构互补结合。

    就可以用高敏感度的CCD相机对动物体内进行***观察而不会伤害到动物本身。在萤光素酶中加入正确的萤光素底物就可以放出荧光,而发出的光子可以被光敏感元件,如萤光探测器或改进后的光学显微镜探测到。这就使得对包括***在内的多种生命活动进程进行观察成为可能。例如,萤光素酶已经被用于商业化的次世代焦磷酸定序技术,借由dNTP接上DNA链时水解放出的焦磷酸,透过另外一个硫酸盐腺甘酸转移酶反应,萤光素酶能将产物ATP与萤光素转化为冷光,机器借此探测光线并定序。萤光素酶也可以被用于检测血库中所存血液中的红血球是否开始破裂。法医可以用含有萤光素酶的溶液来检测犯罪现场中残留的血迹。医院用萤光素酶的发光来发现特定的疾病。萤光素酶还可以作为“报告蛋白”被用于分子生物学研究中,例如,用于在转染过萤光素酶的细胞中检测特定启动子的转录情况或用于探测细胞内的ATP的水平;这一技术被称为报告基因检测法或萤光素酶检测法(LuciferaseAssay)。萤光素酶是一个热敏感蛋白,因此经常被用于研究蛋白热变性过程中热休克蛋白的保护能力。此外,萤光素酶水母素的发光强度与环境中钙离子浓度相关,因此可用于检测生物体内的钙。D-荧光素钾盐的配置是什么?

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