室温培育30min后加入细胞孔板中，置于培养箱常规培养。2)单克隆细胞筛选转染24h后胰酶消化细胞并按1∶6比例接种到新6孔板中，同时加入实验确定的浓度G418，随后每2d更换一次培养基并维持G418筛选直至单细胞抗性克隆的出现。分别挑选单一抗性克隆至96孔板，待其逐渐增殖后转入24孔板中继续传代培养。3)荧光素酶活性鉴定阳性克隆单一抗性克隆传代至第五代时用LuciferaseAs-sayAystem检测荧光素酶活性。检测时，各克隆按1×105个/孔接种到24孔板，24h后细胞裂解液裂解12000rpm，4℃离心10min，收集裂解物，取上清10μl加入96孔白板中，向每孔加入50μl荧光素酶96microplateluminometer连续读底物，停留2s后，取10s的荧光值（RLU），每个克隆设3个复孔，保留RLU值高的细胞克隆继续传代培养，再过5代后进行荧光素酶活性检测。保留RLU值维持较高的克隆直至第30代，荧光素酶活性更高的几个克隆MCF-7-luc即为阳性克隆.各不同数量细胞克隆的荧光值检测7-luc阳性克隆细胞按细胞数将筛出的MCF-4×104、2×104、1×104、5000、2500、1250、625、312和156分别接种到96孔黑板中，另外一组只有细胞，一组只有培养基作对照，设置2个复孔，常规培去上清并用PBS洗两次。D-荧光素钾盐使用浓度怎么样？上海体外研究D-荧光素钾盐公司

    并实现了在非常高通量的应用中使用报告基因检测。[1]随着UltraGlo?萤光素酶的发展，现在已经实现了“加样-读数”的ATP检测方法。ATP是细胞健康的重要指标，这使得CellTiter-Glo?能有效测定细胞活力，尤其是在高通量应用中。该检测原理还促进了其它ATP检测平台的诞生，尤其是用于研究ATP酶（如激酶）的Kinase-Glo?（2004年）和ADP-Glo?（2009年）酶检测系统。[1]2003Caspase-Glo?3/7检测除了可以利用萤火虫萤光素酶反应测定样品中萤光素酶或ATP的含量外，还可以检测底物（luciferin）浓度的变化。通过将luciferin与可被不同酶类识别并产生反应的保护基团偶联，能对这些酶进行灵敏的“加样-读数”检测，如半胱天冬酶（caspase）和其它蛋白酶。[1]2007One-Glo?萤光素酶检测系统随着对萤火虫萤光素酶化学反应的进一步了解以及Promega生物学家和化学家团队的建立，一种改进的luciferin面世，能更好地用于典型的报告基因检测应用。这种新的底物——fluoroluciferin，是新型底物开发的一个早期实例。[1]2012NanoLuc?萤光素酶基于定向进化和新型底物开发方面的经验，研究人员从虾的萤光素酶改造设计出一种新型萤光素酶报告基因，即NanoLuc?萤光素酶。徐州荧光素钾盐D-荧光素钾盐活题成像做D-荧光素钾盐测试真的靠谱吗？

    而发出不同颜色的荧光。萤火虫有2000多种，而叩甲总科（包括萤火虫、叩头虫和相关昆虫）则有更多，因此它们的荧光素酶对于分子系统学研究很有用。目前研究得更透彻的荧光素酶是来自Photinini族萤火虫中的北美萤火虫（Photinuspyralis）。荧光素酶报告基因（Luc）是指以荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(fireflyluciferase)活性的一种报告系统。荧光素酶可以催化luciferin氧化oxyluciferin，在luciferin氧化的过程中，会发出生物荧光(bioluminescence)。荧光素酶是能够催化不同底物氧化发光的一类酶，哺乳细胞无内源性荧光素酶。更常用的荧光素酶有细菌荧光素酶、萤火虫荧光素酶和Renilla荧光素酶。细菌荧光素酶对热敏感，因此在哺乳细胞的应用中受到限制。萤火虫荧光素酶灵敏度高，检测线性范围宽达7～8个数量级，是更常用于哺乳细胞的报道基因，用荧光比色计即可检测酶活性，因而适用于高通量筛选。随着具有膜通透性和光裂解作用的萤火虫荧光素酶的应用，无需裂解细胞即可检测酶活性。Renilla荧光素酶催化肠腔（coelenterazine）氧化，产物可透过生物膜，可能是更适用于活细胞的报告分子。将荧光素酶报告基因载体转染到细胞中。

    普遍应用于整个生物技术领域，尤其是体内活ti成像技术。其作用机制是在ATP和荧光素酶的作用下，荧光素（底物）能够被氧化发光。当荧光素过量时，产生的光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关性。萤光素酶（英文名称：Luciferase）是自然界中能够产生生物荧光的酶的统称，其中更有代表性的是一种学名为Photinuspyrali'的萤火虫体内的萤光素酶，萤火虫发光的腹部或海洋的蓝色发光波浪将大自然中生物发光奇迹呈现于世。在生物化学和分子生物学的早期，这一现象被认为是发展生物分析的有力平台。1991年，Promega发布了di一代萤光素酶分析产品，并启动了基于萤光素酶的进一步创新计划，通过持续致力于研究和创新生物发光系统建立了各种不同的分析技术Promega萤光素酶技术发光史里程碑AGlo-ingHistoryofInnovationandDiscovery1990年12月，Promega初次提出萤火虫萤光素酶(Luc)作为一种新兴报告基因技术的应用可能性。当时的人们认为，萤火虫萤光素酶具备的生物发光特性、极高的灵敏度和快速简单的检测流程等特点，可能会对分子生物学家的研究产生重要的影响。几个月后，di一代萤火虫萤光素酶报告基因载体和检测试剂在Promega诞生，使这项新技术正式并更范围广地为全球研究人员服务。D-荧光素钾盐的激发波长是多长？

    短期保存：4℃干燥避光长期保存：-20℃干燥避光母液保存：-20℃避光有效期长期保存：有效期一年工作液：先用现配使用方法1.体外生物发光检测1）用无菌蒸馏水溶解D-荧光素钾盐，配制成30mg/mL的储存液(100-200×)，混匀。立即使用，或分装于-20℃避光保存，避免反复冻融。2）用预热好的组织培养基将储存液稀释至mg/mL的工作液浓度。3）去除细胞培养基。作者：思存链接：zhuanlan./p/来源：知乎著作权归作者所有。商业转载请联系作者获得授权，非商业转载请注明出处。高斯荧光素酶近年来，其他荧光素酶（例如高斯荧光素酶）的使用有所增加，因为这些报告基因较小，并且不需要ATP的存在。高斯荧光素酶是一种20kD的蛋白质，可通过氧气催化腔肠素氧化，产生光。来自于海洋足类高斯氏菌的生物发光酶在表达后可有效地从哺乳动物细胞中分泌出来。Amplite?高斯荧光素酶报告基因检测试剂盒（#AAT-12530）使用专有的发光配方来定量细胞培养基中的荧光素酶活性。当该试剂与高斯荧光素酶相互作用时，产sheng发光产物，该发光产物提供强发光。Amplite高斯荧光素酶报告基因测定试剂盒特点：提供了与HTS液体处理仪器兼容的所有基本组件它们具有高灵敏度。D-荧光素钾盐检测公司招代理吗？徐州荧光素钠盐D-荧光素钾盐使用说明

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    通过开发新的方法来改变萤火虫萤光素酶检测的信号动力学，例如Bright-Glo?、Steady-Glo?和Dual-Glo?允许使用微孔板进行检测。而“加样-读数”的形式简化了样品处理，并实现了在非常高通量的应用中使用报告基因检测。[1]随着UltraGlo?萤光素酶的发展，现在已经实现了“加样-读数”的ATP检测方法。ATP是细胞健康的重要指标，这使得CellTiter-Glo?能有效测定细胞活力，尤其是在高通量应用中。该检测原理还促进了其它ATP检测平台的诞生，尤其是用于研究ATP酶（如激酶）的Kinase-Glo?（2004年）和ADP-Glo?（2009年）酶检测系统。[1]2003Caspase-Glo?3/7检测除了可以利用萤火虫萤光素酶反应测定样品中萤光素酶或ATP的含量外，还可以检测底物（luciferin）浓度的变化。通过将luciferin与可被不同酶类识别并产生反应的保护基团偶联，能对这些酶进行灵敏的“加样-读数”检测，如半胱天冬酶（caspase）和其它蛋白酶。[1]2007One-Glo?萤光素酶检测系统随着对萤火虫萤光素酶化学反应的进一步了解以及Promega生物学家和化学家团队的建立，一种改进的luciferin面世，能更好地用于典型的报告基因检测应用。这种新的底物——fluoroluciferin。上海体外研究D-荧光素钾盐公司

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