外泌体来源及内含物几乎所有类型的细胞都可以分泌外泌体，同时外泌体也***存在于体液中，包括血液、眼泪、尿液、唾液、乳汁、腹水等。目前研究发现外泌体中富含核酸（microRNA、lncRNA、circRNA、mRNA、tRNA等）、蛋白、胆固醇等。外泌体的表面marker主要有CD63、CD81、CD9、TSG101、HSP27等。外泌体的来源及内含物外泌体鉴定目前对于外泌体的鉴定主要有四种方法：透射电子显微镜（TEM）、Nanosight、WesternBlot、流式细胞术。外泌体鉴定方法参考文献：EGTrams,CJLauter,NSalem,[J].BiochimBiophysActa,1981,645:[J].JExpMed,1996,183(3):?mK,BossiosA,[J].NatCellBiol,2007,9(6):á[J].AnnualReviewofPhysiology,2016,78(1):[J].JournalofClinicalInvestigation,2014,124。科研实验的外泌体检测服务介绍。全自动专业做外泌体研究

外泌体膜染料：PKH67、PKH26产品组成：方法一：外泌体直接染色1.适量（10ug，BCA法测量）外泌体溶于500ulDiluentC中（可以用DPBS代替）；2.适量的PKH26（10ug外泌体推荐用量不超过1ul）染料溶于等体积的DiluentC中（可以用DPBS代替），温和吹打混匀；3.将步骤2中的溶液加入1中并迅速吹打混匀。4.避光，室温静置孵育5-10min；5.加入等体积（2ml）的血清（exosomefree），或者1%BSA终止染色反应；6.使用超滤/超离方式洗净未与外泌体结合的PKH26染料。南京外泌体膜染料翌科生物做外泌体检测服务嘛？

    10）请参阅图21所示的细胞在静力状态下和细胞受到牵张力状态下的电镜对比图，其中，左图为细胞在静力状态下的电镜图，右图为细胞受到牵张力状态下的电镜图。具体的，细胞受到了牵张力的作用而发生变形，变形幅度为30%。综上，通过本实施例的细胞外泌体优化培养方法培养的细胞不仅可以提高细胞的外泌体分泌量，而且分泌的外泌体的生物学质量更强。相比现有技术中的例如对于细胞进行的气压应力刺激的培养方法，本实施例的细胞外泌体优化培养方法拥有以下几点优势：（1）本实施例的细胞外泌体优化培养方法无需额外的应力刺激系统，只靠细胞培养生长的过程必需的培养基的循环供给即可产生循环的应力刺激，即对于本实施例中的培养基既是细胞生长的营养来源，又形成了拉伸凝胶产生细胞应力刺激的原动力。现有技术中例如气压产生的应力刺激，气压属于细胞培养生长的非必需的因素，本质意义上可以说，气压刺激属于外部的额外刺激因素。（2）本实施例采用的细胞外泌体优化培养系统中的培养基时刻处于循环流动状态，这样可以及时将细胞产生并分泌道培养基中的外泌体排出并搜集，减少外泌体被其他细胞摄取的可能性，从而提高了外泌体的产量，并且时刻为细胞提供更充沛的营养物质。

    除了RAB蛋白，外泌体中富含具有外泌体膜交换以及融合作用的膜联蛋白(包括膜联蛋白1、2、4、5、6、7、11等)。外泌体膜上富含参与外泌体运输的四跨膜蛋白家族(CD63,CD81和CD9))、热休克蛋白家族((HSP60,HSP70,HSPA5,CCT2和HSP90以及一些细胞特异性的蛋白包括A33(结肠上皮细胞来源)、MHC-Ⅱ(抗原提呈细胞来源)、CD86(抗原提呈细胞来源)以及乳凝集素(不成熟的树突状细胞)。其它一些外泌体中的蛋白包括多种的代谢类的酶(数值DH,烯醇化酶1,醛缩酶1,PKM2,PGK1,PDIA3,GSTP1,DPP4,AHCY,TPL1,抗氧化蛋白,P4HB,LDH,亲环素A,FASN,MDH1和CNP)、核糖体蛋白(RPS3)、信号转导因子(黑色素瘤分化相关因子,ARF1,CDC42,人类红细胞膜整合蛋白,SLC9A3R1)、粘附因子(MFGE8、整合素)、细胞骨架蛋白以及泛素等。折叠编辑本段提纯方式外泌体的提取主要包括以下几种方式。一是超速离心法，这是目前外泌体提取更常用的方法。此种方法得到的外泌体量多，但是纯度不足，电镜鉴定时发现外泌体聚集成块，由于微泡和外泌体没有非常统一的鉴定标准，也有一些研究认为此种方法得到的是微泡不是外泌体。二是过滤离心，这种操作简单、省时，不影响外泌体的生物活性，但同样存在纯度不足的问题。翌科生物专做外泌体检测服务,医学实验,医学模型构建。

    也不利于流体中的细胞、蛋白和外泌体与通道中的抗体结合。因此，急需一种特异性分离外泌体的芯片，高通量、体积小和操作简单，为**早期及伴随诊断提供工具。技术实现要素：有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种外泌体分离微流控芯片；本发明的目的之二在于提供利用所述外泌体分离微流控芯片捕获外泌体的方法。为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：1、外泌体分离微流控芯片，所述芯片包括多个交错人字型微混合器，每个shm的人字形凹槽呈周期性地交错排列。推荐的，所述人字型微混合器每个循环周期由十个人字形的不对称连续区域组成。推荐的，所述交错人字型微混合器组成八个单独的人字形微通道，八个人字形微通道通过集管与入口连接。推荐的，通道的总高度(h)50μm，凹槽的高度与通道的高度(α)的比率设定为；v字形和通道轴的夹角(θ)为45°，主波矢量q＝2π/100μm。2、利用所述外泌体分离微流控芯片捕获外泌体的方法，包括如下步骤：在芯片通道内包被捕获抗体，加入体液样本，用ph为～，收集洗脱液。推荐的，所述洗脱的缓冲液流速为80μl/min。推荐的，所述捕获抗体的浓度为5～20μg/ml。推荐的，所述外泌体胰腺*血浆外泌体，包被抗体为gpc1抗体。翌科生物是专做外泌体检测服务,医学实验,医学模型构建。研究所哪家做外泌体分离

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    且及时带走各种细胞代谢废物，减少细胞代谢废物对于细胞活性的影响。对于细胞培养本身来说，也需要更新培养基，以使得细胞实时处于比较好的生长环境，因此，利用循环更新的培养基来产生对于细胞的应力刺激，相比创造提供额外的应力刺激原动力来说，本实施例在节约成本上有明显的优势。（3）对于本实施例的细胞外泌体优化培养系统中，使用的是循环更新的培养基来对细胞产生应力刺激，相比现有技术中例如公告号为cn公开的基于微流控芯片的加压细胞培养系统和方法中采用的由压力的调控来产生对于细胞的应力刺激，虽然压力可以产生对于细胞的应力刺激，可以用于实验环境下细胞受到应力刺激下的各种性能的检测，但是对于细胞分泌外泌体来说，压力相对于细胞培养来说毕竟形成了外部的刺激因素，这样的外部刺激因素对于细胞外泌体的分泌存在影响，这样的影响是正向影响还是反向影响需要验证才能确定，并且可以肯定的是是，压力对于细胞分泌外泌体来说不是必需的因素。而本实施例采用的培养基作为细胞应力刺激的原动力，对于细胞本身培养的过程来说培养基本来就是必需品，不是外部因素，因此可以有效避免例如压力等外部刺激可能存在的对于细胞培养产生的方向的不利的影响。全自动专业做外泌体研究

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