本发明的有益效果在于:本发明通过设计人字形微流控芯片,当标本通过时形成各向异性流,***形成微涡流,使外泌体与抗体充分结合,克服常规微流控芯片平滑通道因混合不均致反应不完全的弊端,用此平台靶向外泌体膜表面的生物标记物gpc1,直接将外泌体从血浆中分离出来。与标准的外泌体分离方法(超速离心法)相比,本发明的装置显示出更高的特异性(4倍的差异)和相对简洁的步骤(捕获和释放<20分钟),并且需要较小的样品量(200μl)即可检测到pc患者和健康人的gpc1外泌体含量的差异。附图说明为了使本发明的目的、技术方案和有益效果更加清楚,本发明提供如下附图进行说明:图1为外泌体分离微流控芯片实物图。图2为外泌体分离微流控芯片结构图(a:人字形微流控芯片平面设计图;b:人字形微流控芯片立体设计图;c:电镜下的通道结构);图3为各向异性流示意图;图4为洗脱液验证(a:外泌体捕获原理(抗原抗体结合);b:洗脱液和中和液的滴定曲线,在10:1的比例下,ph调节至;c:通过nta技术比较pbs和buffer洗脱液的外泌体分离效果。图5为抗体浓度筛选结果(a:不同浓度抗体nta检测结果;b:平滑通道与人字形通道比较结果;c:本发明方法与超速离心比较结果)。南京外泌体检测服务公司,科研课题解决方案?江苏高效液相色谱外泌体提取试剂
外泌体是指包含了复杂RNA和蛋白质的小膜泡(30-150nm),现今,其特指直径在40-100nm的盘状囊泡。1983年,外泌体初次于绵羊网织红细胞中被发现,1987年Johnstone将其命名为"exosome"。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体,经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。所有培养的细胞类型均可分泌外泌体,且外泌体天然存在于体液中,包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。有关他们分泌和摄取及其组成、"运载物"和相应功能的精确分子机制刚刚开始研究。外泌体目前被视为特异性分泌的膜泡,参与细胞间通讯,对外泌体的研究兴趣日益增长,无论是研究其功能还是了解如何将其用于微创诊断的开发。1983年,外泌体初次于绵羊网织红细胞中被发现,1987年Johnstone将其命名为"exosome"。现今,其特指直径在40-100nm的盘状囊泡。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。其主要来源于细胞内内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体,经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。折叠编辑本段构成外泌体富含胆固醇和鞘磷脂。2007年,Valadi等发现鼠的肥大细胞分泌的exosome可以被人的肥大细胞捕获。全自动高效液相色谱外泌体粒径分析外泌体检测服务-价格低-周期短-数据清晰。
《ScientificReports》杂志发表了该方法更新数据,表明PS法可提取相当高纯度的外泌体。[1]六是色谱法,这种方法分离到的外泌体在电镜下大小均一,但是需要特殊的设备,应用不范围广。人体内多种细胞及体液均可分泌外泌体,包括内皮细胞、免疫细胞、血小板、平滑肌细胞等。当其由宿主细胞被分泌到受体细胞中时,外泌体可通过其携带的蛋白质、核酸、脂类等来调节受体细胞的生物学活性。外泌体介导的细胞间通讯主要通过以下三种方式:一是外泌体膜蛋白可以与靶细胞膜蛋白结合,进而***靶细胞细胞内的信号通路。二是在细胞外基质中,外泌体膜蛋白可以被蛋白酶剪切,剪切的碎片可以作为配体与细胞膜上的受体结合,从而***细胞内的信号通路。有报道称一些外泌体膜上蛋白在其来源细胞膜上未能检测出。三是外泌体膜可以与靶细胞膜直接融合,非选择性的释放其所含的蛋白质、mRNA以及microRNA。当外泌体在1980年初次被发现后,其被认为是细胞排泄废物的一种方式,如今随着大量对其生物来源、其物质构成及运输、细胞间信号的传导以及在体液中的分布的研究发现外泌体具有多种多样的功能。外泌体的功能取决于其所来源的细胞类型。
也不利于流体中的细胞、蛋白和外泌体与通道中的抗体结合。因此,急需一种特异性分离外泌体的芯片,高通量、体积小和操作简单,为**早期及伴随诊断提供工具。技术实现要素:有鉴于此,本发明的目的之一在于提供一种外泌体分离微流控芯片;本发明的目的之二在于提供利用所述外泌体分离微流控芯片捕获外泌体的方法。为达到上述目的,本发明提供如下技术方案:1、外泌体分离微流控芯片,所述芯片包括多个交错人字型微混合器,每个shm的人字形凹槽呈周期性地交错排列。推荐的,所述人字型微混合器每个循环周期由十个人字形的不对称连续区域组成。推荐的,所述交错人字型微混合器组成八个单独的人字形微通道,八个人字形微通道通过集管与入口连接。推荐的,通道的总高度(h)50μm,凹槽的高度与通道的高度(α)的比率设定为;v字形和通道轴的夹角(θ)为45°,主波矢量q=2π/100μm。2、利用所述外泌体分离微流控芯片捕获外泌体的方法,包括如下步骤:在芯片通道内包被捕获抗体,加入体液样本,用ph为~,收集洗脱液。推荐的,所述洗脱的缓冲液流速为80μl/min。推荐的,所述捕获抗体的浓度为5~20μg/ml。推荐的,所述外泌体胰腺*血浆外泌体,包被抗体为gpc1抗体。翌科生物的外泌体检测服务,医学实验,医学模型构建做的怎么样?谁知道?
4)临床大样本量验证差异基因;5)外泌体功能检测:·小室共培养研究外泌体功能·影响细胞功能研究(细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭等)·机制研究(miRNA靶基因验证、功能蛋白、信号通路、lncRNA等)6)动物研究。用于分离外泌体样本类型及所需量:血清样本:3-5ml血浆样本:3-5ml无血清培养细胞上清:50-100ml体液:15-20ml外泌体单项实验服务,欢迎来电/邮件垂询:(1)外泌体抽提服务:超速离心获得外泌体(2)外泌体粒径检测(3)透射电镜检测(4)westernblot检测(蛋白标志物CD9/CD63/CD81/HSP70)(5)无外泌体血清(6)可以提供常规细胞培养服务,省去客户培养细胞麻烦及采购去外泌体血清成本。(7)提供外泌体荧光标记:PKH67标记(绿色)或PKH26标记(红色)。联系人:刘经理电话:手机:/(7:00-24:00。外泌体提取找哪个公司做比较好?高校专门做外泌体检测
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外泌体(Exosome)一、外泌体简介外泌体(Exosome)是由细胞分泌而来的微小囊泡,直径约为30-200nm,密度在,具有杯状形态、双层膜结构,天然存在于血液、尿液、唾液、母乳和细胞培养基等生物体液中。包括肿瘤细胞在内几乎所有类型的细胞(免疫细胞、神经细胞、干细胞),都可以产生并释放exosome。Exosome内含有与细胞来源相关的蛋白质rRNA和microRNA,Exosome可通过细胞膜受体直接促进受体细胞,也可运输蛋白质、mRNA、miRNA、lncRNA、circRNA,甚至细胞器进入受体细胞,参与细胞间通讯。Exosome在免疫应答、炎症反应、血管生成、凋亡、凝血和废物处理等生理过程发挥关键作用,不同细胞来源的exosome所含有的RNA和蛋白成分不尽相同,可作为多种疾病的早期诊断标记物,也能作为靶向药物的载体进行疾病好质。miRNA是一类22nt左右大小的非编码分子,它可以通过外泌体从一个地方转运到另外一个地方行使基因沉默功能。通过检测外泌体中miRNA表达变化,可以发现外泌体中miRNA特异性功能。二、研究现状1、外泌体研究的主要应用外泌体的功能取决于其所来源的细胞类型,其可参与到机体免疫应答、抗原提呈、细胞迁移、细胞分化、中刘侵袭等方方面面。江苏高效液相色谱外泌体提取试剂
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