与IdeS不同，Genovis的GingisREX（RgpB）是一种精氨酸特异性蛋白酶，可消化精氨酸残基的C末端蛋白质，包括难以与其他酶消化的Arg-Pro键。该酶可用于肽图分析、从头肽测序和翻译后修饰分析。精氨酸残基的特异性C-末端消化；在其他困难的精氨酸-脯氨酸序列中可靠消化；产生更长的肽-提高序列覆盖率。GingisREX是一种半胱氨酸蛋白酶，可特异性地消化肽键C末端到精氨酸残基，包括与脯氨酸相连的精氨酸。半胱氨酸是酶活性所必需的。与胰蛋白酶消化相比，可生成更长的肽，胰蛋白酶消化可以通过高分辨率质谱进行分离和鉴定。这为自下而上方法的样品制备提供了更多选择，以实现替代的酶解曲线和更高的序列覆盖率。GingisREX在赖氨酸上没有活性，通常使用Arg-C观察到。该酶在5.0-9.0的宽pH值范围内具有活性，它需要半胱氨酸并被盐酸胍抑制。该酶是从牙龈卟啉单胞菌中纯化的。这就是为什么Fc/2和GLP-1肽都被检测为几种变体。浙江FabALACTICAIdeS蛋白酶蛋白组学

为什么客户想在他们的工作试用Genovis的FabRICATOR（IdeS）。FabRICATOR的高特异性(在铰链下方有单个消化位点)以及它对IgG种和亚类表现出活性的事实使其成为高效表征一系列不同分子的理想工具。FabRICATOR的另一大优势是速度。在大多数IgG上，您可以在短短30分钟内生成F(ab’)2和Fc/2片段，这一速度简化了方法开发，并允许快速有效的中层表征，使客户能够在不比做完整质量实验长太多的时间内获得更多关于分子的信息。Genovis发现更多的缓冲液与溶液中的FabRICATOR消解相容（更多信息）。Genovis已经测试了PBS和150mM醋酸铵，pH7，结果良好。并且应该也适用于FabRICATORHPLC。然而，缓冲液的离子强度会影响抗体片段在FabRICATORHPLC（IdeS）色谱柱上的保留，并且IgG1亚基需要至少100-150mM盐才能洗脱为单个窄峰。其他IgG亚类或融合蛋白可能需要对缓冲液组成进行一些优化。云南GlycINATORIdeS蛋白酶蛋白组学几乎完全消化了Fc结构域中的连接子，留下了接近均质的Fc/2产物。

大多数zhiliao抗体携带人 IgG1 骨架，双特异性或多特异性形式的开发正在迅速增加。此类抗体的分析需要特异性酶来表征特性，例如单价结合、二硫键扰乱和配对 Fc 糖基化。传统方案包括使用木瓜蛋白酶和 Lys-C 的酶消化，这需要优化以大限度地减少过度消化并获得足够的产量。Genovis的半胱氨酸蛋白酶 FabALACTICA （IgdE） 在铰链上方的一个特定位点消化人 IgG1，以产生完整的 Fab 和 Fc 片段。该酶在大多数人IgG1 上也具有活性，其中铰链区域以下的突变已被引入。为了证明FabALACTICA的性能，我们消化了不同的人IgG1抗体，并使用RP-HPLC分析了所得片段。用FabALACTICA消化后观察到的定义峰显示了不同人IgG1抗体的均质片段生成和强大的酶性能。FabALACTICA 酶也可用于生成完整的 Fc 片段。

Genovis的FabRICATOR（IdeS）是一种独特的酶，可在铰链区域下方的特定位点消化IgG，产生均匀的F（ab'）2和Fc/2片段。除IgG外，没有其他底物是已知的。IgG在30分钟内消化，如果孵育时间延长，则不存在过度消化的风险。由于FabRICATOR在生理反应条件下消化IgG，因此保留了免疫反应性。在37°C下获得良好的活性，但也可以在室温下使用较长的反应时间进行消解。FabRICATOR可消化人类的所有亚类以及猴子、兔子和绵羊IgG的某些亚类。它对小鼠IgG2a和IgG3的活性有限-为了消化这些抗体物种，我们建议使用FabRICATORZ。FabRICATOR是从化脓性链球菌克隆而来的，并在大肠杆菌中表达。该酶含有His标签，分子量为37725Da。FabRICATOR是IdeS的重组修饰形式，由GenovisAB开发，用于需要高标准和一致性的生物技术应用。有一种检测FabRICATOR酶的方法。了解有关山羊多克隆抗体Anti-FabRICATOR的更多信息。可用于抗体高阶结构（HOS）结晶和NMR研究、双抗或多抗的表征、单价结合研究或完整Fc聚糖分析。

与IdeS不同，在蛋白质zhiliao药物的质量控制过程中，详细分析和识别质量属性非常重要。对于具有柔性连接子的融合蛋白疗法，这包括确认连接蛋白的质量以及蛋白质接头的质量。使用 Genovis的GlySERIAS 的连接子酶切可以通过分离连接的蛋白质结构域来帮助这种质量控制。然而，连接子中的大量甘氨酸残基提供了酶的许多潜在消化位点，导致连接子内多个位点同时水解。消化的产物通常由连接蛋白的几种变体组成，并保留不同程度的连接子。虽然观察到的异质性通常不会对蛋白质亚基的详细表征产生负面影响，但有助于直接表征连接子，但有时需要更均匀的消化产物来详细分析单个蛋白质结构域。单一酶切位点和质谱的精度确保了Fc糖基化谱检测，用于监测批次间的一致性和其他关键质量属性。甘肃GlycINATORIdeS蛋白酶蛋白组学

Genovis的内切糖苷酶 IgGZERO和 GlycINATOR 还可以研究完整的 ADC，但降低复杂性并提高分辨率。浙江FabALACTICAIdeS蛋白酶蛋白组学

LC-MS中级分析是一种被大众接受的分析方法，用于快速表征mAb和其他基于IgG的生物制药。它有助于理解多种关键质量属性 （CQA），例如糖基化、氧化和 C 端赖氨酸剪切。这种关于翻译后修饰（PTM）的详细知识是生物制药开发和制造所必需的。Genovis的FabRICATOR HPLC酶色谱柱，可快速进行单克隆抗体的柱上酶切，并产生一致的亚基。该色谱柱含有固定化的FabRICATOR（IdeS）酶，可在铰链下方快速且特异性地消化IgG，产生F（ab'）2和Fc片段，而不会出现任何过度消化的风险。为了减少样品处理并为样品制备提供自动化解决方案，FabRICATOR被共价固定在树脂上，并装在适用于HPLC的PEEK色谱柱硬件中。使用FabRICATOR HPLC色谱柱，只需稍作修改，即可使用标准HPLC-MS装置自动生成抗体亚基。然后，FabRICATOR HPLC色谱柱上消解产生的亚基被捕获在在线连接的反相（RP）色谱柱的柱头上。浙江FabALACTICAIdeS蛋白酶蛋白组学