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大/小鼠肾缺血再灌注损伤（RIRI）模型_艾菱菲生物
一、背景
肾缺血再灌注损伤（RIRI）是急性肾损伤（Acute Kidney Injury, AKI）的主要病理机制之一，常见于肾移植、休克、创伤或心脏手术等临床场景。缺血期导致肾组织缺氧和能量代谢障碍，再灌注后活性氧（ROS）爆发、炎症反应加剧及细胞凋亡***，进一步加重肾损伤。研究RIRI的分子机制及干预措施对改善临床预后具有重要意义。
二、造模方法
- 实验动物选择品系：SD大鼠、Wistar大鼠或C57BL/6小鼠（品系差异可能影响损伤程度）。
- 性别与体重：通常选用雄性，大鼠体重200-250 g，小鼠20-25 g。
- 适应性饲养：标准SPF环境，自由饮食饮水，术前禁食12小时（不禁水）。
手术造模流程大鼠RIRI模型步骤：
- 保定麻醉开腹手术：腹中线切口暴露双侧肾蒂（血管、输尿管及神经束）。
- 缺血诱导：用无创动脉夹（如Bulldog夹）夹闭单侧或双侧肾蒂。①单侧夹闭：需对侧肾切除（用于肾功能评价）。②双侧夹闭：直接模拟双肾缺血（需严格控制缺血时间以防高死亡率）。
- 再灌注：移除动脉夹恢复血流，肉眼观察肾脏颜色由暗红转为鲜红。
- 缝合：逐层缝合肌肉层和皮肤，术后保温并注射镇痛药物（如布托啡诺）。
关键参数：
- 缺血时间：30-45分钟（依研究目的调整，时间过长易致不可逆损伤）。
- 再灌注时间：24-48小时为常见观察窗口。
小鼠RIRI模型
- 麻醉与切口：麻醉，腹侧切口约1 cm。
- 肾蒂暴露：用棉签轻推肠管，暴露肾蒂后以微血管夹（如Fine Science Tools夹）夹闭。
- 缺血与再灌注：缺血时间通常缩短至20-30分钟（因小鼠代谢快，耐受力低于大鼠）。
- 注意事项：术中维持体温（37℃）以防低温加重损伤。假手术组*开腹不夹闭肾蒂。
三、检测与评价肾功能评估
血清生化指标：
血肌酐（Scr）和尿素氮（BUN）：通过尾静脉或心脏**，酶法或比色法检测，升高提示肾小球滤过功能受损。
尿液分析：尿蛋白（UPRO）和尿NAG酶（肾小管损伤标志物）。
（二）组织病理学分析
HE染色：观察肾小管上皮细胞空泡化、刷状缘脱落、管型形成及炎细胞浸润。
损伤评分：根据肾小管坏死程度分为0-4级（0：无损伤；4：>50%坏死）。PAS染色：评估肾小球基底膜完整性。
（三）氧化应激与炎症指标氧化损伤：
MDA（丙二醛）：脂质过氧化产物，硫代巴比妥酸法检测。
SOD（超氧化物歧化酶）和GSH（谷胱甘肽）：抗氧化能力指标。炎症因子：ELISA检测血清或肾组织TNF-α、IL-6、IL-1β水平。
（四）细胞凋亡检测TUNEL染色：标记凋亡细胞核，计算凋亡率。Western blot：检测凋亡相关蛋白（如Bax、Bcl-2、Caspase-3）。
（五）分子机制研究NF-κB、MAPK信号通路：蛋白表达与磷酸化水平分析。自噬相关蛋白（LC3-II/LC3-I、p62）：评估自噬在RIRI中的作用。
四、结论
RIRI大鼠和小鼠模型是研究急性肾损伤机制及干预策略的有效工具，结合多维度评价体系可***解析病理生理过程。未来需进一步开发无创监测技术（如生物发光成像）并探索跨物种转化研究。以上内容可根据具体实验需求调整参数和方法细节。
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