pirb在轴突生长锥表达，位于富含肌动蛋白的前缘和synapsin免疫阳性的囊泡中，在神经元突起的表达呈点状分布。文献表明，pirb表达随年龄增加，特别是在老龄认知损伤的小鼠海马中，pirb能够抑制轴突再生和突触可塑性。研究表明小鼠aβ寡聚体对海马长时程增强的破坏作用需要pirb的参与，在ad转基因模型中，pirb不仅参与成年小鼠记忆缺失，而且介导幼年小鼠视皮层突触可塑性的丢失。这些研究提示我们，pirb参与突触可塑性，抑制pirb可能对ad起到***效应。但是在cns，pirb的功能和下游抑制性信号通路仍然未被阐明，因此迫切需要pirb的细胞和动物模型。目前对于pirb基因功能的研究，多采用可溶性的pirb的胞外段(pirbextracellularpeptide，pep)和抑制剂，或者采用慢病毒转染。前者受到是否能够透过血脑屏障和抑制剂效率的影响，后者慢病毒转染在原代细胞和在体的转染效率比较低，使研究pirb的功能受到极大的限制。为解决这些问题，我们通过crispr/cas9技术建立了pirb基因敲入小鼠，将pirb基因敲入c57bl/6j的rosa26位点，为研究pirb在免疫系统或者神经系统的作用和机制提供了很好的工具。技术实现要素：本发明的目的在于提供pirb基因敲入的小鼠动物模型。通过小鼠疾病模型的构建有助于我们深入揭示潜在致病基因作用机制。上海疾病动物模型建模原理

实验动物年龄：成年5、实验动物体重：160-200g6、实验动物环境：SPF级1、实验方法：热力致皮肤损伤法。麻醉大鼠，根据体重腹部备皮，然后固定于实验台上。将大鼠移近加热纯净水的烧杯，将纱布条浸入热水中，待水温恒定于99℃时，取出纱布，立即平铺于待烫部位，于纱布接触大鼠皮肤后开始计时。致伤3s为浅II°烫伤，致伤10s为深II°烫伤。2、检测标准：a.皮肤大体观察：致伤3s大鼠局部皮肤发红、轻微水肿。愈合后毛发生长良好，有少量红褐**素沉着，皮肤轻微挛缩，表皮光滑；致伤10s大鼠局部皮肤发白、水肿。愈合后毛发生长良好，皮肤瘢痕形成，表面粗糙不平。b.皮肤组织病理学观察：致伤3s大鼠表皮层次尚清楚，细胞明显肿胀、变性，层次结构尚清楚，细胞核结构不清；致伤10s大鼠表皮细胞部分脱落，结构不清，明显变性、坏死，部分细胞已溶解视觉疾病动物模型建模原理小鼠疾病模型应用于转化医学研究中的思路与策略该研究从临床患者中筛选到潜在的致病基因。

1、动物模型名称：胆管结扎致肝胆管性肝硬化大鼠模型2、实验动物种属：SD大鼠3、实验动物性别：雄性4、实验动物年龄：5周5、实验动物体重：200~220g6、实验动物环境：SPF级1、实验方法：用胆管结扎法。大鼠按10mg/kg体重腹腔注射3％戊巴比妥钠麻醉，腹部皮肤消毒，无菌操作沿腹部正中线剪开腹腔，分离出胆管，在胆管近端和远端2处结扎胆管。手术后正常饲养28天。28天后解剖取肝脏进行组织病理学检查。2、检测标准：肝脏病理切片镜下小胆管伴纤维组织增生积分按程度为0-3分：0分：无明显病变；1分：呈局灶性分布，受累面积在30%以下者；2分：呈多灶性分布，受累面积在30%-70%之间者；3分：呈弥漫性分布，受累面积在70%以上者。

实验期间每天进行阴道涂片，观测动情周期变化。进一步地，检测***水平是指：检测雌***(e2)、促卵泡生长素(fsh)和促黄体生成素(lh)的水平。进一步地，检测对比卵巢重量是指：比较各组大鼠双侧卵巢脏器系数。进一步地，阴道涂片是指：采用阴道脱落细胞涂片法，使用染色剂为亚甲基蓝。本发明利用顺铂成功地建立了大鼠卵巢早衰模型，为基础研究建立稳定的卵巢早衰动物模型奠定了良好的基础。本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义。提及的术语和短语如有与公知含义不一致的，以本发明所表述的含义为准。附图说明图1：e2水平检测结果示意图。图2：fsh水平检测结果示意图。图3：lh水平检测结果示意图。图4：大鼠体重检测结果示意图。图5：大鼠卵巢重量统计示意图。图6：动情周期检测(光镜下10倍)示意图，其中，a、b、c、d依次为：动情前期，动情期，动情后期，动情间期。图7：he染色观察不同方法造模对卵泡形态的影响(光镜下10倍)示意图，其中，a、b、c、d依次为：空白组，2mg组，4mg组，6mg组。具体实施方式下面结合实施例对本发明作进一步的说明。然而，本发明的范围并不限于下述实施例。本领域的专业人员能够理解，在不背离本发明的精神和范围的前提下~动物疾病模型的另一个富有成效的用途。

r3):5’-atactccgaggcggatcacaa-3’步骤4、鉴定为pirb基因敲入的f0代雄性小鼠7周龄、雌性小鼠6周龄分别与野生型异性小鼠交配获得f1代杂合子小鼠，图2为本发明f1代杂合子小鼠pirb基因敲除小鼠的流程图，小鼠出生后20天进行pcr鉴定，若有阳性小鼠出生，则表示转基因已经整合到生殖细胞。(1)通过pcr方法对获得的f1代小鼠进行基因型的鉴定：(a)dna的提取：方法1：采用takaraminibestuniversalgenomicdnaextractionkit()来获得高纯度的基因组dna。步骤a.每只小鼠剪下一段尾巴(2～5mm)，放入离心管中，加入180μlbuffergl，20μl蛋白激酶k和10μlrnasea。步骤b.将步骤a离心管内于56℃孵育过夜。步骤c.过夜后12000rpm离心2min去除杂质。步骤d.加入200μlbuffergb和200μl无水乙醇，充分混匀。步骤e.将吸附柱放在收集管上，将步骤d得到的样品加到吸附柱里，12000rpm离心2min，弃掉收集管中液体。步骤f.弃去液体后在吸附柱中加入500μlbufferwa，12000rpm离心1min，弃掉收集管中液体。步骤g.在收集管中加入700μlbufferwb，12000rpm离心1min。弃掉收集管中液体。注意：bufferwb需要与100％乙醇预混，沿管壁加入bufferwb冲走残余的盐。步骤h.重复步骤g一次。哪里可以做动物模型？常州品质好的疾病动物模型建模

动物模型的意义和优越性！上海疾病动物模型建模原理

该模型能够帮助我们研究pirb基因在免疫系统和神经系统的功能以及下游的调节机制。本发明的另一目的在于提供上述小鼠动物模型的构建方法。本发明所采用的第一种技术方案是：pirb基因敲入的小鼠动物模型，包括确定pirb基因的待敲入的特异性靶位点grna1和grna2，将pirb基因敲入c57bl/6j小鼠的rosa26基因的内含子1内，所述grna1的基因序列如seqid**所示，grna2的基因序列如。本发明所采用的第二种技术方案为：pirb基因敲入的小鼠动物模型的构建方法，将步骤3中性成熟的阳性f0小鼠分别与野生型鼠交配繁一代，获得f1代杂合子小鼠，通过pcr、测序和southern杂交确定动物基因型；将步骤4获得的f1代杂合子小鼠近交获得f2代纯合子小鼠。上海疾病动物模型建模原理