核酸提取细胞裂解方法之酶裂解。酶裂解是在处理样本时在样本中添加一种酶来消化蛋白质或细胞结构，如酵母细胞壁和丝状。优势：实验室中的理想方法，过程中无需机械裂解设备；选择性的去除细胞壁，留下细胞部分采用另一种裂解方式（通常是化学裂解），方法灵活，避免了一些由机械裂解产生的破坏。劣势：耗时较长（酶消化可能需要1小时）而且消化酶的价格昂贵；其次，由于消化酶可能会诱导细胞产生变化变化，进而可能影响基因表达，对后续的基因表达鉴定结果产生影响导致结果不准确，因此不适合进行基因表达分析。南京正扬生物有自动化核酸提取试剂盒吗？深圳宿主细胞残留DNA提取操作流程

采用纳米磁珠法进行核酸提取时的注意事项：1、裂解过程中，样品的裂解要充分，让核酸充分暴露出来。2、在样本核酸含量高，裂解液可充分裂解的范围内，增加样本量可以增加提取效果。3、清洗过程要控制次数，如果清洗次数过多，会增加清洗过程中的核酸损失量。一般情况下，清洗次数在2～4次比较好。4、提取的核酸如果有蛋白及（或）盐类残留，可在提取过程中加入蛋白酶K降解样品中的蛋白，减少蛋白残留污染，同时用高浓度有机溶剂对核酸进行清洗，减少盐残留对酶活的抑制，从而防止杂质对下游应用产生抑制。5、在核酸提取量较低时，并不是增加磁珠用量，提取效果越好。郑州复制型腺相关病毒核酸提取常见问题磁珠法核酸提取流程。

NaCl在核酸提取中的作用是提供一个高盐环境，使DNA充分溶解于液相。沉淀DNA时总会加入高浓度的盐,加盐的目的是破坏能使蛋白质保持稳定的两个因素,使蛋白和DNA分离并沉淀下来。而此时盐的阳离子会与DNA结合形成DNA-阳离子盐溶于溶液中,再用无水乙醇可以将DNA-阳离子盐沉淀下来。提取DNA时先加0.14mol/L氯化钠，因为在这种浓度的氯化钠溶液中，DNA的溶解度比较低，而蛋白质的溶解度增加，这样通过过滤能将DNA分离开，以除去蛋白质。再加入95%的酒精能使DNA沉淀，因为在这个浓度下DNA溶解度比较低。如果直接加酒精不先加氯化钠，DNA和蛋白质都能被酒精所沉淀，就无法将DNA和蛋白质分离开。所以必须先加氯化钠后加酒精，顺序不能颠倒。

核酸提取中在细胞裂解后后往往需要进行纯化处理。纯化是指在细胞裂解后，核酸被选择性的从周围细胞成分中释放出来，集中在水溶液或合适的缓冲溶液中以供下有使用。细胞裂解后的步骤，统称为纯化。纯化方法包括：离心柱提取和纯化法；苯酚/氯仿和乙醇沉淀法；纳米磁珠法提取法纯化法。离心柱是通过特殊硅基质吸附材料，能够特定吸附DNA，而RNA和蛋白质顺利通过，然后利用高盐低PH结合核酸，低盐高PH值洗脱，来分离纯化核酸。苯酚/氯仿和乙醇沉淀法是通过酚/氯仿处理细胞破碎液或者组织匀浆后，在水相中主要溶解以DNA为主的核酸成分，在有机相中主要是脂类物质，蛋白质位于两相之间。纳米磁珠法是运用纳米技术对超顺磁性纳米颗粒的表面进行改良和表面修饰后，制备成超顺磁性氧化硅纳米磁珠。该磁珠能在微观界面上与核酸分子特异性地识别和高效结合。利用氧化硅纳米微球的超顺磁性，在Chaotropic盐(盐酸胍、异硫氰酸胍等)和外加磁场的作用下，从血液、动物组织、食品、病原微生物等样本中分离出DNA和RNA。宿主细胞残留核酸提取时，提取效果不理想的原因可能有哪些？

苯酚/氯仿和乙醇沉淀法进行核酸提取的操作步骤：1、苯酚和氯仿的接触：裂解的样品与苯酚/氯仿通常通过强旋涡混合。旋涡确保所有有机成分都能与苯酚/氯仿混合物充分相互作用，以达到完全溶解和去除的目的。2、离心：步骤1过后可见两个相。含有核酸的水相位于顶部，而底部的有机相含有蛋白质、脂质和其他大分子。然后离心样品以完全分离这两个相。3、相分离：用移液管小心地除去水相4、乙醇沉淀：用乙醇沉淀、纯化核酸。在乙醇沉淀过程中，加入盐和乙醇以缓冲水溶液中的核酸。盐缓冲糖磷酸骨架，乙醇改变溶液的介电常数。这使得核酸能够从水溶液中分离出来，从而可以通过高速离心分离。5、重悬：在水或TE缓冲液中重新溶解成团的DNA或RNA。Vero细胞残留核酸提取。深圳复制型慢病毒核酸提取常见问题

支原体检测时，为什么要做核酸提取？深圳宿主细胞残留DNA提取操作流程

核酸提取纯化的总原则是要保证核酸一级结构的完整性，防止降解，同时要排除其他分子的污染。因为一级结构是核酸分子**基本的结构，储存着全部的遗传信息，是进一步研究的基础。为了保持核酸的完整性，在提取过程中要注意防止核酸酶对核酸的降解。还要防止化学因素（酸碱等）和物理因素（高温或机械剪切等）引起核酸变性或破坏。制备RNA要特别注意防止核酸酶的作用，因为核酸酶分布很广，活力很高；而对DNA更重要的是防止张力剪切作用，因为DNA分子特别长，容易断裂。对于核酸的提取纯化应达到以下三点要求：①核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子；②其他生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降低到比较低程度；③排除其他核酸分子的污染，如提取DNA分子时，应去除RNA分子，反之亦然。深圳宿主细胞残留DNA提取操作流程