CAR-T细胞的微生物安全风险可能涉及细菌、真   菌、支原体、外来病毒和来自载体生产的具有复制能力的病毒的污染。微生物安全问题需要高度关注，因为在生产过程中很容易发生微生物污染，而且蕞终的细胞产品无法净化。CAR-T细胞的微生物安全主要通过对生产材料的严格检测、按照CGMP要求严格控制生产过程、对产品进行微生物检测来保证，检测内容包括无菌检测、支原体检查、可复制型病毒检测、微生物检测。南京正扬生物目前可提供支原体快检和可复制型病毒检测相关产品。南京正扬有复制型逆转录病毒检测试剂盒吗？病毒检测试剂盒

RCL/RCR病毒检测的方法FDA推荐的RCL检测方法是利用敏感细胞对病毒载体中可能存在的RCL进行培养扩增，并在培养终点进行检测。?扩增期：将待测物与对HIV-1易感并且可大量扩增病毒的细胞系(通常用C8166)孵育，细胞传代5次以上，培养至少3周。?指示期：3周后收集培养上清，接种于C8166细胞中培养7d后检测RCL标志物。?检测：A：P24ELLISA的方法：适用于由载体制备过程中病毒基因组之间的重组形成RCL的检测。B：PERT法：当RCL进行扩增后，也可应用PERT检测方法测定逆转录酶活性。该方法的缺点是在某些细胞中存在高背景。C：qPCR方法：采用实时定量PCR方法(Q-PCR)测定假型病毒南京RCL病毒检测试剂盒CAR-T细胞医治产品中复制型慢病毒检测的监管要求。

CAR-T的生产中常用慢病毒载体将CAR基因高效地导入T细胞中。尽管慢病毒载体具有复制缺陷，但如果在慢病毒生产过程中发生重组可能有形成复制型慢病毒（RCL）或复制型逆转录病毒（RCR）的潜在风险。根据蕞新发布的《体外基因修饰系统药学研究与评价技术指导原则（试行）》和《免疫细胞治   疗产品药学研究与评价技术指导原则（试行）》,复制型病毒作为重要的安全性风险关注点，需评估制备和临床使用的风险。因此使用慢病毒载体相关的细胞产品，RCL和RCR病毒检测作为安全性检测在细胞药物的研发和生产过程中至关重要。

复制性慢病毒/复制性逆转录病毒检测的背景：慢病毒载体来源于病原体HIV-1，为了保证产品的安全性，目前基因医治产品所用的慢病毒载体/逆转录病毒载体均为非复制性。通过将基因组中的辅助蛋白删除，并将结构基因分别通过3-4个质粒系统进行分别包装，形成三质粒系统或者四质粒系统，如图1所示，极大的降低了产生具有复制能力慢病毒的可能性，这意味着至少需要2-3次完整的重组时间才能产生一个具有复制能力的慢病毒，在此基础上进一步修饰改造，构建自失活的慢病毒载体（SIN），极大的提供包装病毒的安全性，此外使用VSV-G蛋白取代env蛋白增加载体的稳定性及受体细胞范围。RCL/RCR产生的主要原因是转移载体和包装载体同源序列的重组。随着新的载体系统的发展与应用，载体系统中各元件之间发生同源重组的变化导致RCL/RCR生成机制和结构的变化愈加复杂。而且，重组不仅限于载体系统之间各组分发生的重组，也包括载体成分和细胞基因组之间的重组。重组腺相关病毒检测方法有哪些？

南京正扬生物科技有限公司自主研发生产的rcAAV复制型腺相关病毒检测试剂盒有哪些优点？①试剂盒经过独特的设计开发，可以防止PCR产物污染；②产品检测灵敏度高；③重复性好，同一样品重复检测20次，CV＜15%；④检测时间短，从样品提取纯化到出结果只需2.5h；⑤适应性强，针对不同机型，不同实验室条件，检测结果稳定；⑥可提供自动化服务，自动化完成样品核酸提取纯化；⑦货期短，供应快；

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复制型逆转录病毒检测要求有哪些？病毒检测试剂盒

基于细胞培养法和qPCR快检法都能实现对重组腺相关病毒载体(rAAV)中复制型腺相关病毒(rcAAV)的污染率的检测，但两者在实际检测中都存在检测值不够准确的风险（基于细胞培养法存在低于实际值的风险qPCR快检法存在高于实际值的风险）。南京正扬生物科技有限公司自主研发生产的复制性腺相关病毒检测试剂盒（PCR荧光探针法）是一款既适用于基于细胞培养法对rcAAV的检测，也适用于对rcAAV的直接检测的试剂盒，可达到两种方法间相互验证、相互补充的目的。试剂盒中Reference基因和Target基因包含在同一定量参考品中可同时实现对rAAV载体和rcAAV浓度快速、灵敏、特异性的定量检测。病毒检测试剂盒