宿主细胞残留DNA检测:南京正扬生物自主研发生产的HEK293宿主细胞残留DNA检测片段化分析试剂盒,采用荧光定量PCR法,可同步实现对残留DNA和特定大小的DNA片段的定量测定。产品针对靶标序列设计扩增不同大小产物的引物和探针,分别对扩增的4种不同大小片段设置检测体系并建立标准曲线,根据对应扩增片段的标曲计算其残留量和分布相对量,灵敏度可达到fg级别。试剂盒配有各大小片段DNA定量参考品,可与宿主细胞残留DNA样品前处理试剂盒配套使用。美国FDA对HEK293宿主细胞残留DNA检测的要求。苏州Vero细胞残留DNA检测产品
现行《中国药典》的qPCR检测法中,针对不同的疫苗,其宿主DNA残留量有不同的要求,比如基于vero细胞的狂犬疫苗,DNA残留含量要求不高于3ng/剂,基于vero细胞的脊髓灰质炎疫苗,DNA残留量不高于50pg/剂,基于CHO细胞的乙肝疫苗,DNA残留量不高于10pg/剂。因此,宿主细胞残留DNA间测对于试剂和仪器的检测灵敏度都提出了极高的要求。而要准确检测出宿主DNA残留量,则需要采用标准曲线的觉对定量方法,根据《中国药典2020》对残留DNA检测方法的要求,其标准曲线要求R2≥0.98,斜率在-3.1到-3.8范围内,每组加标样品回收率在50%-150%之间,RSD≤30%。宁波毕赤酵母残留DNA检测注意事项生物制品中宿主细胞残留DNA检测的要求。
实时荧光定量PCR(qPCR)技术在生物制品质量控制方面应用非常普遍,如宿主细胞残留DNA检测,鼠源、禽源等外源病毒检测,微生物快检(支原体、分枝杆菌、细菌、zhen菌等),复制型病毒检测(RCL、RCR、rcAAV等)、质粒拷贝数检测及其它工艺杂质检测等。qPCR检测结果以扩增曲线图呈现,正常扩增曲线为S型,分为基线期、指数扩增期、线性扩增期和平台期;线形光滑、拐点清晰,基线平直或略微下降,无明显上扬。定量检测实验中,对标曲的要求主要从斜率(与扩增效率相关)和R2两方面进行考察,要求斜率满足-3.8~-3.1(对应扩增效率为83.3%~110%),R2满足高于0.99。
CHO宿主细胞残留DNA检测产品广泛应用于生物制药行业中的质量控制和安全监测。其主要用途包括:①生物制品质量控制:通过检测CHO细胞残留DNA的存在和数量,可以评估生物制品的质量和纯度,确保产品符合质量标准和法规要求。②安全性评估:CHO细胞残留DNA可能携带病毒、细菌或其他有害基因,对患者造成潜在风险。通过检测CHO细胞残留DNA,可以评估生物制品的安全性,保障患者的用药安全。③工艺监测:CHO细胞残留DNA的检测可以监测生产过程中的污染情况,及时采取措施避免CHO细胞残留DNA的污染,保证生产过程的可控性和稳定性。哪些公司有HEK293宿主细胞残留DNA检测试剂盒?
宿主细胞残留DNA检测的方法介绍:①荧光探针qPCR法:可进行定量分析,被USP/EP/ChP收录,检出限可低至1pg/Sample,蕞小检测片段可至50bp,该检测方法具备灵敏度高、特异性高、通量高的特点,但是成本相对其他方法略高。②荧光染色法:该方法可进行定量分析,被USP/ChP收录,样品残留量需达到50pg/Sample才能被检测,蕞小检测片段为100bp,该检测方法缺乏序列特异性,但是成本较低。宿主细胞残留DNA检测的方法介绍:①免疫阈值法:该方法可进行定量分析,被USP/EP收录,检出限低至3pg/Sample,蕞小检测片段为100bp,该检测方法是对非特异性序列进行免疫检测,很可能会出现检测值虚高的情况,存在检测局限性。②DNA探针杂交法:只能进行半定量分析,被USP/ChP收录,检出限低至6pg/Sample,蕞小检测片段为50bp,该检测方法存在32P标记的探针半衰期短、放射等问题。HEK293宿主细胞残留DNA检测的质量控制。合肥残留DNA检测
宿主细胞残留DNA检测定量分析。苏州Vero细胞残留DNA检测产品
南京正扬生物科技有限公司自主研发生产了一款E.coli宿主细胞残留DNA检测试剂盒,采用qPCR-荧光探针法,在qPCR技术的基础上利用荧光探针原理,定量检测样本中E.coli残留DNA,简化qPCR反应操作的反应液配置时的操作步骤,检测快速,专一性强,性能可靠,蕞低检测限可以达到fg水平。实验操作步骤包括标准品稀释、样品前处理、样品DNA提取纯化、PCR试剂配制及加样、PCR扩增检测、实验数据分析。
宿主细胞残留DNA检测过程中,标准品稀释环节有哪些注意事项?①用来做稀释的耗材建议使用1.5mL离心管,容量太大的耗材会增加DNA的吸附作用,容量太小易导致混匀不充分。②为了做出更好的线性,进行倍数稀释的时候要吸取较大体积标准品溶液(避免用1μL标准品+9μL稀释液这样的小体积体系进行稀释)。③每进行一步稀释都要进行充分的混匀,在点样前也要进行混匀。④为了提高准确性,每个浓度建议做3个复孔。 苏州Vero细胞残留DNA检测产品