为什么要做宿主细胞残留DNA检测？近年来热度骤增的生物制品药物对诸多疾病疗效斐然，在药品市场中所占比重也是节节攀升。于是生物制品与之俱来的生物安全性问题被渐渐提上日程，其中宿主细胞残留DNA由于可能会传递仲瘤或病毒相关基因，存在潜在的危险性，各国药品监督管理机构对其残留量有着严格的限度控制。同时，各国药典也陆续提供数种关于宿主细胞残留DNA检测经典的方法，目前以实时定量聚合酶链式反应(PCR)方法为蕞优，因其专一性强、灵敏度高、快速且可实现高通量。用qPCR的方法进行宿主细胞残留DNA检测的试剂盒有哪些？宁波E1A残留DNA检测产品

实时荧光定量PCR法宿主细胞残留DNA检测的原理和方法：实时荧光定量PCR是基于PCR扩增时，在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，产物的增加可以通过荧光信号指示，通过实时监控PCR体系中的荧光信号，对样本中初始模板进行定量分析。实时荧光定量PCR可实时检测产物的生成量，通过加入已知浓度的标准样品绘制标准曲线，然后根据待测样品在标准曲线中的位置推算初始模板的浓度，从而达到检测宿主细胞残留DNA含量的目的。

为什么要做宿主细胞残留DNA检测?众所周知，大部分生物制剂是不经过胃肠道直接进入体内，所以除了生物活性外，相关部门对药品中杂质的含量要求非常严格。其中，宿主细胞残留DNA因为具有特别的潜在安全风险，一直是监管机构关注的重点。生物制品中的重组蛋白药、抗体药、疫苗等产品是用连续传代的动物细胞株表达生产，虽然经过严格的纯化工艺，但产品中仍有可能残余宿主细胞DNA。这些残余DNA可能带来传染性或致瘤性风险，比如残留DNA可能携带HIV病毒或Ras  ai基因。 宁波宿主细胞残留DNA检测优缺点国家对Ecoli宿主细胞残留DNA检测的要求有哪些？

南京正扬生物科技有限公司自主研发生产了一款E.coli宿主细胞残留DNA检测试剂盒，采用qPCR-荧光探针法，在qPCR技术的基础上利用荧光探针原理，定量检测样本中E.coli残留DNA，简化qPCR反应操作的反应液配置时的操作步骤，检测快速，专一性强，性能可靠，蕞低检测限可以达到fg水平。实验操作步骤包括标准品稀释、样品前处理、样品DNA提取纯化、PCR试剂配制及加样、PCR扩增检测、实验数据分析。

宿主细胞残留DNA检测过程中，标准品稀释环节有哪些注意事项？①用来做稀释的耗材建议使用1.5mL离心管，容量太大的耗材会增加DNA的吸附作用，容量太小易导致混匀不充分。②为了做出更好的线性，进行倍数稀释的时候要吸取较大体积标准品溶液（避免用1μL标准品+9μL稀释液这样的小体积体系进行稀释）。③每进行一步稀释都要进行充分的混匀，在点样前也要进行混匀。④为了提高准确性，每个浓度建议做3个复孔。

各国药典对于宿主细胞残留DNA检测方法的推荐：理想的定量检测方法其灵敏度应能检测到约10pg/剂量的残留DNA。杂交法、基于DNA结合蛋白的免疫色谱法（阈值法）和定量PCR方法因灵敏度均可达到检测要求，都属于经典方法。①《美国药典》将高灵敏度、高特异性的qPCR法和非序列特异性的DNA结合蛋白法作为残留DNA检测的推荐方法；③《欧洲药典》将高灵敏度、高特异性的qPCR法和非序列特异性的DNA结合蛋白法作为残留DNA检测的推荐方法；②《中国药典》则收录了特异性高的定量PCR法和半定量的DNA探针杂交法以及非序列特异性的荧光染色法。宿主细胞残留DNA检测。

南京正扬生物科技有限公司自主研发生产的Vero宿主细胞残留DNA检测试剂盒利用Taqman荧光探针原理，定量检测各种生物制品及药品的中间品、半成品和成品中残留的Vero宿主细胞DNA，产品具备检测快速、操作简单、特异性强、检测灵敏度高、稳定性好、能防止PCR产物污染等特点。蕞低检测限可以达到fg级别。试剂盒配套有VeroDNA定量参考品，已溯源至国家标准品。产品检测方法可溯源至中国药典方法，通则〈3407〉。宿主细胞残留DNA检测的目的：①确认纯化工艺合理，能有效去除宿主DNA残余。②确认产品中杂质含量符合标准要求。非特异性的DNA检测结果不能区分究竟是生产中污染、检测污染、或是工艺缺陷引起的DNA残余，就无法为解决方案提供有效信息。在严格的生产体系中，残留DNA检测是解决工艺合理性问题，任何外源污染问题都归SOP或GMP管理体系解决。③保证生物制品的安全性，生物制品中即便是微量地来源于宿主细胞的外源性DNA都有传递仲瘤或病毒相关基因的可能性。国家对CHO宿主细胞残留DNA检测的要求有哪些？宁波E1A残留DNA检测产品

美国FDA对Vero宿主细胞残留DNA检测的要求。宁波E1A残留DNA检测产品

实时荧光定量PCR（qPCR）技术在生物制品质量控制方面应用非常普遍，如宿主细胞残留DNA检测，鼠源、禽源等外源病毒检测，微生物快检（支原体、分枝杆菌、细菌、zhen菌等），复制型病毒检测（RCL、RCR、rcAAV等）、质粒拷贝数检测及其它工艺杂质检测等。qPCR检测结果以扩增曲线图呈现，正常扩增曲线为S型，分为基线期、指数扩增期、线性扩增期和平台期；线形光滑、拐点清晰，基线平直或略微下降，无明显上扬。定量检测实验中，对标曲的要求主要从斜率（与扩增效率相关）和R2两方面进行考察，要求斜率满足-3.8~-3.1（对应扩增效率为83.3%~110%），R2满足高于0.99。宁波E1A残留DNA检测产品