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合肥正扬生物质粒残留DNA检测注意事项

来源: 发布时间:2023-12-28

南京正扬CHO宿主细胞残留DNA检测原理:试剂盒利用Taqman荧光探针原理,定量检测各种生物制品及药品的中间品、半成品和成品中残留的CHO宿主细胞DNA。PCR反应过程中通过荧光标记的特异性探针检测PCR产物量,通过连续监测反应体系中荧光数值的变化,可即时反映特异性扩增产物量的变化。在反应过程中所释放的荧光强度达到预设的阈值时,体系的PCR循环数(Ct值)与该体系所含的起始DNA模板量的对数值呈线性关系。采用已知浓度的DNA标准品,依据以上关系,构建标准曲线,对特定模板进行定量分析,测定供试品中的外源DNA残留量。检测快速、特异性强、检测灵敏度高,蕞检测限可以达到fg级别。CHO宿主细胞残留DNA检测试剂盒。合肥正扬生物质粒残留DNA检测注意事项

qPCR法宿主细胞残留DNA检测的原理:PCR反应过程中可通过荧光标记的特异性探针检测PCR产物量。带有一对荧光分子的探针与样品中DNA通过碱基互补配对的原则结合,随着PCR反应的进行,Taq聚合酶合成DNA,同时沿5’-3’方向水解DNA探针,一对荧光分子随着探针的水解而分开,发出荧光信号。通过连续监测反应体系中荧光读数的变化,可即时反映特异性扩增产物量的变化。在反应过程中所释放的荧光强度达到预设的阈值时,体系的PCR循环数(Ct值)与该体系所含的起始DNA模板量的对数值呈线性关系。采用已知浓度的DNA标准品构建标准曲线,由此计算样品中的DNA残留量。苏州HEK293细胞残留DNA检测优缺点宿主细胞残留DNA检测。

CHO宿主细胞残留DNA检测常见问题:①检测灵敏度:qPCR法可以达到非常低的检测灵敏度,通常可以检测到1个CHO细胞残留DNA分子。这种高灵敏度可以有效地避免生物制品中CHO细胞残留DNA对患者的潜在风险。②特异性:qPCR法的特异性非常高,可以准确区分CHO细胞残留DNA和其他DNA。通过选择性扩增和特异性引物的设计,可以排除其他污染源对结果的干扰。③标准曲线:为了准确定量CHO细胞残留DNA的数量,需要建立标准曲线。标准曲线是通过已知浓度的CHO细胞残留DNA样品制备的,通过测定PCR产物的阈值周期数(Ct值),与已知浓度的CHO细胞残留DNA样品的对应关系,建立起浓度和Ct值之间的线性关系。

宿主细胞残留DNA是影响生物制品安全性的关键因素之一,它不仅会降低生物药的有效性,还可能带来传染性或致瘤性等安全问题。因此建立合适的宿主细胞残留DNA检测方法有助于监测生产工艺,确保生物制品的安全性和质量。各国药品监督管理机构对宿主细胞残留DNA的残留量有着严格的限度控制,因此都相继出台了有关生物制品中宿主细胞残留DNA的指南。其中,定量PCR法是中国2019年国家药典委员会确认的外源性DNA残留测定方法,也是新版USP中推荐生物制品中宿主残留DNA的检测标准方法。qPCR法做宿主细胞残留DNA检测的优缺点有哪些?

用qPCR法进行宿主细胞残留DNA检测时,出现扩增效率超出标准要求(低于83.3%或高于110%)的原因有哪些?①设计的引物探针不适用:重新分析靶标序列进行设计。②标曲浓度设定太高,超出标曲线性范围:对范围进行验证,选取合适标曲范围。③人员操作问题,如稀释错误、制备过程震荡时间过长等:人员上岗前应接受培训并做到熟练操作,考核合格后方可上岗。④移液器未校准或品质问题导致量取不准:定期对移液器进行校准并选择好品质移液器。

用qPCR法进行宿主细胞残留DNA检测时,出现扩增曲线异常的可能原因是什么?①软件参数设置不当可能引起标曲参数或检测结果异常。如扩增曲线信号早出现在14个循环左右,基线却设置为3-15,导致仪器将14个循环出现的荧光信号默认为基线部分,出现结果异常。建议将BaselineEnd设置为扩增信号出现的前一个循环,或由软件自动设置。②扩增曲线飘起:该现象通常出现于高浓度模板情况下,扩增曲线Ct值在10以内的样品。针对此类样品检测,设置标曲时建议尽量控制标曲蕞浓度Ct值控制在10以上。检测样品时建议对样品进行稀释后再测试。 哪些公司有CHO宿主细胞残留DNA检测试剂盒?南京质粒残留DNA检测

美国FDA对Vero宿主细胞残留DNA检测的要求。合肥正扬生物质粒残留DNA检测注意事项

南京正扬生物科技有限公司自主研发生产了一款E.coli宿主细胞残留DNA检测试剂盒,采用qPCR-荧光探针法,在qPCR技术的基础上利用荧光探针原理,定量检测样本中E.coli残留DNA,简化qPCR反应操作的反应液配置时的操作步骤,检测快速,专一性强,性能可靠,蕞检测限可以达到fg水平。实验操作步骤包括标准品稀释、样品前处理、样品DNA提取纯化、PCR试剂配制及加样、PCR扩增检测、实验数据分析。


宿主细胞残留DNA检测过程中,标准品稀释环节有哪些注意事项?①用来做稀释的耗材建议使用1.5mL离心管,容量太大的耗材会增加DNA的吸附作用,容量太小易导致混匀不充分。②为了做出更好的线性,进行倍数稀释的时候要吸取较大体积标准品溶液(避免用1μL标准品+9μL稀释液这样的小体积体系进行稀释)。③每进行一步稀释都要进行充分的混匀,在点样前也要进行混匀。④为了提高准确性,每个浓度建议做3个复孔。 合肥正扬生物质粒残留DNA检测注意事项

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