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正扬生物rcAAV病毒检测厂家

来源: 发布时间:2023-12-27

基因治  疗产品是近年来国内外药物研发的热点,通常由各种或非载体携带治  疗基因组成。在载体中,慢载体(LVs)由于其有效的将基因整合进靶细胞基因组、稳定的基因表达等特点,被认为是有希望的基因治  疗载体。考虑到慢对人的原性及相关的安全性,所使用的慢载体均为复制缺陷型载体,但在载体生产过程中可能由于同源重组或非同源重组导致可复制性慢(RCL)的产生,RCL可以整合到细胞基因组中,从而导致原ai基因激   活,抑ai基因破坏等,因此,这类产品中的复制型慢检测是安全性检测中非常重要的项目,美国FDA及中国CDE都要求在生产的整个过程及不同阶段都要进行RCL检测,以确保无RCL的污染。复制型病毒检测试剂盒要求有哪些?正扬生物rcAAV病毒检测厂家

qPCR法RCL/RCR病毒检测:目前许多CAR-T企业采用Q-PCR方法直接测定CAR-T终产品中的VSV-G序列或psi-gag序列,因考虑到CAR-T细胞种产品一般需要新鲜输注的特殊情况,基于细胞培养法的RCL/RCR检测方法周期较长,建议在细胞产品制备过程中进行多控制(如对慢病毒载体及生产终末细胞采用基于细胞培养方法测定RCL/RCR,以确保生产工艺过程中不存在RCL的风险),细胞终产品阶段可采用qPCR检测法快速放行。qPCR法RCL/RCR病毒检测:目前许多CAR-T企业采用Q-PCR方法直接测定CAR-T终产品中的VSV-G序列或psi-gag序列,因考虑到CAR-T细胞种产品一般需要新鲜输注的特殊情况,基于细胞培养法的RCL/RCR检测方法周期较长,建议在细胞产品制备过程中进行多控制(如对慢病毒载体及生产终末细胞采用基于细胞培养方法测定RCL/RCR,以确保生产工艺过程中不存在RCL的风险),细胞终产品阶段可采用qPCR检测法快速放行。。杭州正扬生物RCR病毒检测操作流程复制型腺相关病毒检测。

基于细胞培养法和qPCR快检法都能实现对重组腺相关病毒载体(rAAV)中复制型腺相关病毒(rcAAV)的污染率的检测,但两者在实际检测中都存在检测值不够准确的风险(基于细胞培养法存在低于实际值的风险qPCR快检法存在高于实际值的风险)。南京正扬生物科技有限公司自主研发生产的复制性腺相关病毒检测试剂盒(PCR荧光探针法)是一款既适用于基于细胞培养法对rcAAV的检测,也适用于对rcAAV的直接检测的试剂盒,可达到两种方法间相互验证、相互补充的目的。试剂盒中Reference基因和Target基因包含在同一定量参考品中可同时实现对rAAV载体和rcAAV浓度快速、灵敏、特异性的定量检测。

实时荧光定量PCR法rcAAV复制型腺相关病毒检测试剂盒的操作流程包括病毒DNA提取、qPCR试剂配制、qPCR加样及上机检测、结果分析四个环节。病毒DNA提取包含样品前处理、样品裂解液消化、病毒DNA与磁珠结合、一次洗涤、二次洗涤、洗脱;qPCR试剂在配制时需先将试剂放置于室温,避光放置30min,直至试剂融化,各个试剂组分混匀后按照说明书进行配制并分装。在实验室,注意分区操作,降低实验发生污染的风险。

实时荧光定量PCR法rcAAV复制型腺相关病毒检测试剂盒的操作流程包括病毒DNA提取、qPCR试剂配制、qPCR加样及上机检测、结果分析四个环节。病毒DNA提取包含样品前处理、样品裂解液消化、病毒DNA与磁珠结合、一次洗涤、二次洗涤、洗脱;qPCR试剂在配制时需先将试剂放置于室温,避光放置30min,直至试剂融化,各个试剂组分混匀后按照说明书进行配制并分装。在实验室,注意分区操作,降低实验发生污染的风险。 为什么要做复制型病毒检测?

根据现有法规和指导原则可以发现,RCL病毒检测方法主要包含指示细胞培养法、ELISA法、PCR/q-PCR法和PERT法。因为指示细胞培养法检测需28天,并且因为阳性对照病毒的性质,要求其需要在P3或者P2实验室环境中进行,致使该方法具有耗时长,环境要求高的特点。相比而言,基于VSV-G序列的q-PCR方法或基于psi-gag序列的PCR方法,因其具有检测时间短、环境条件简单、灵敏度高和可重复性强等优点,被许多CAR-T申报企业作为快速放行方法。欢迎联系复制型慢病毒检测方法有哪些?宁波病毒检测注意事项

复制型腺相关病毒检测方法有哪些?正扬生物rcAAV病毒检测厂家

RCL复制型慢病毒检测的背景:CAR-T(chimericantigenreceptorT-cellimmunotherapy),即嵌合抗原受体T细胞免疗法。它是一种医治种的新型精确靶向疗法,能够精确高效,且有希望治好ai的免医治方法。目前,主要有两种病毒载体用于CAR-T细胞基因转导:γ逆转录病毒载体和慢病毒载体。目前基因医产品所用慢病毒载体均是非复制型的,但在病毒包装过程中,可能会由于同源或非同源重组等机制产生复制型慢病毒(RCL)。出于安全、有效、质量可控的考虑,应当对该类病毒进行检测,以避免在人体内无控地自我复制,造成伤害,防止发生临床安全性隐患事件。正扬生物rcAAV病毒检测厂家

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