PCR扩增效率的高低直接影响**终信号的判读和实验结果分析。在进行热循环实验时，需检查样品的密封性以及PCR反应板是否和PCR仪热盖完全接触，确保PCR过程中样品反应液没有蒸发。QIAcuity数字PCR系统采用**的微反应腔室封闭方式，固态的物理分割和封闭可有效避免PCR过程中微反应体系的水分蒸发，确保微反应体系中样本反应液浓度的恒定，更易实现准确和精确的定量。原始数据中往往发现阳性信号与阴性背景之间存在许多弱阳性信号。因此需要对引物探针进行重新设计和优化（详见引物探针优化设计）或提升退火温度（探针通常比引物高5~10℃），以消除疑似荧光信号的“雨区“现象；此外，阳性信号和阴性背景间隙过小，导致**终结果无法准确判读。因此需要调整引物探针浓度（建议总反应体系引物浓度为600~800nM；探针浓度为200-400nM）或5' 端**个碱基如有G出现，则将其互补序列设计为实验所用探针，以提高阴阳性信号间隙，便于分析结果的准确判读。近年来，Bio-Rad、凯杰、赛默飞等巨头公司纷纷通过收购、投资等方式布局数字PCR业务。云南高精确度数字PCR活动

近几年来，随着纳米制造技术和微流体技术（nanofabrication and microfluidics）的发展，数字PCR技术遇到了突破技术瓶颈的比较好契机。1997年Kalinina, 、Brown J, 和Silver J使用纳升级芯片进行单克隆模板PCR扩增，获得了美国专利，更重要的是这种采用“电浸润法”进行纳升级芯片制造技术显露雏形。伴随二代测序技术发展起来的“油包水PCR”技术，可以一次生成数万乃至数百万个纳升甚至皮升级别的单个油包水微滴，可以作为dPCR的样品分散载体。天津PCR数字PCR活动整个实验流程可在2小时内完成。

聚合酶链式反应(polymerasechainreaction，PCR)提出至今已有20年时间，期间PCR已发展成为分子生物学领域的一项关键技术和常规技术，极大地推动了生命科学各个领域的发展。特别是90年代后期，美国ABI公司推出的实时荧光定量PCR(realtimePCR，qPCR)技术及相关产品更是将PCR由体外合成及定性/半定量检测技术发展成为一种高灵敏、高特异性和精确定量的基因分析技术。尽管经过十几年时间的迅速发展，qPCR 技术已经用于除外伤和营养缺乏症外所有疾病的诊断，但是，在 PCR扩增过程中影响其扩增效率的因素有很多，不能保证在反应过程中扩增效率保持不变和实际样品与标准样品以及不同样品之间的扩增效率是相同的，由此导致其定量分析所依赖的基础——循环阈值(CT)不是恒定不变的。因此 qPCR 的定量只是“相对定量”，其准确度和重现性依然不能够满足分子生物学定量分析的要求。

单细胞的基因表达分析：基因表达分析有助于了解细胞和组织的特征及其如何应对发育和环境信号的改变。检测已知和未知基因转录水平的方法在过去的四十多年来发生了翻天覆地的变化，变得更加有效，更加敏感，定量更加精细，能够一次性对大量的基因转录本进行分析。但是，在组成复杂的细胞混合物中，尽管***表达的基因可以被识别出来，但来自于少数细胞群体（例如干细胞）的转录本却很可能会被掩盖掉，尤其是在每个细胞中以低丰度形式出现的转录本。为了解决这个问题，单细胞检测技术应用而生，而且逐渐受到了越来越多的重视。ddPCR在单细胞分析中的优势在于它不需要标准曲线就能进行***定量。而且，由于能够以非常高的敏感性区分至少五种不同的基因转录本，因此无需进行其他方法所要求的单细胞cDNA预扩增，这可以消除预扩增和NGS文库准备中潜在的转录本定量失真，能够能加真实的反映单细胞群体中关键基因的特征。需要对反应体系进行拆分和分配。

***代PCR技术是常规PCR技术，对目的基因扩增后进行凝胶电泳，将扩增条带与已知浓度的标准品比较，得到定性结果，但在产物分析时需要开盖操作，容易引起交叉污染，导致假阳性。第二代PCR技术是在PCR反应体系加入荧光基团，利用荧光信号累积实时监测整个PCR反应进程，通过相关数据分析方法对目的基因进行定量分析的技术。数字PCR是第三代PCR技术，是一种采用微流控或微滴化的方法将稀释后的待测样品核酸溶液分散至微反应器或微滴中再在相同条件下进行单分子PCR，检测每一个微反应器或微滴中荧光信号通过直接计数或泊松分布修正得到原始浓度或含量的核酸分子***定量技术。目前大致可分为三类：微反应室/孔板数字PCR、大规模集成微流控芯片数字PCR、液滴数字PCR。高精确度、高灵敏度，荧光定量qPCR灵敏度为1%-0.1%，数字化PCR灵敏度可达0.01-0.001%。天津PCR数字PCR活动

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（5）在SARS-CoV-2核酸参考品制备中，数字PCR能够对核酸进行精确的定量，能够提高世界各国SARS-CoV-2核酸测量结果的一致性和准确性。（6）数字PCR能够灵敏检测与定量环境中的病毒RNA浓度，包括从不同环境中取样的样本（如公共区域、病房、医院卫生间、实验室操作员手套、废水等等）。（7）在实验室样品与临床样品病毒突变检测中，数字PCR适合用于已知的SARS-CoV-2遗传变异检测，特别是对于一些低频突变。（8）在抗病毒药物的研发过程中，病毒载量的变化是评估药物有效性的重要指标，借由数字PCR提供的***定量结果，能够给出更具说服力和准确的评价结果。云南高精确度数字PCR活动