虽然数字PCR的优势与临床应用前景已在许多研究中得到确认,但想要进一步在临床广泛应用,数字PCR需要针对以下几个方面进行升级:商用数字PCR系统需要进一步提升样本检测通量以充分满足COVID-19普筛的需求;需要制定国家或行业统一标准;需要产业界进一步降低设备成本;基于数字PCR的**检测试剂盒需要经过严格多中心评价,并获得NMPA、FDA、CE等监管机构的认证。随着科研和产业的持续研发和投入,未来数字PCR将在实验室或医院得到更多的应用,用于解决科研和临床问题,提供更准确的诊断结果。数字PCR有望成为下一代分子诊断的**技术。低丰度DNA模板分子的精确定量。山东高精确度数字PCR经验丰富
数字PCR采用的策略概括起来非常简单,就是“分而治之”(divide and conquer),这种做法非常类似于计算机科学中的“分治算法”,将一个标准PCR反应分配到大量微小的反应器中,在每个反应器中包含或不包含一个或多个拷贝的目标分子( DNA模板) ,实现“单分子模板PCR扩增”,扩增结束后,通过阳性反应器的数目“数出”目标序列的拷贝数。在实际的数字PCR实验中,事实上是通过呈现两种信号类型的反应器比例和数目进行统计学分析,计算出原始样本中的模板拷贝数。浙江数字PCR数字PCR欢迎咨询在gDNA长度≥20kb或进行拷贝数变异检测实验时,必须对样品进行酶切处理。
拷贝数变异(CNV)研究:数字PCR直接读取阳性信号,通过泊松分布校正得到目标基因的***拷贝数,为拷贝数变异的研究提供了***的检测精度。采用数字PCR能够有效对二代测序(NGS)和微阵列比较基因组杂交(aCGH)等实验结果进行验证,并具有检测周期短、成本低、样本通量高等特点。低丰度DNA模板分子的精确定量:由于绝大部分微液滴中只含单个或不含模板分子,使得低丰度DNA模板分子的扩增不受高丰度模板分子扩增的竞争抑制:与此同时,样品中可能存在的抑制剂也在分配到微液滴的过程中进行了相对稀释,作用于单个微液滴内模板扩增的抑制剂数量大幅降低,从而提高PCR扩增对抑制剂的耐受程度,因此可应用于诸多临床样品(如血液、尿液、粪便、痰液、胸腹水、脑脊液等)中痕量核酸标记物的检测。一般而言,定量PCR的检测灵敏度约在1%,NGS的灵敏度可达到1%,而数字PCR的检测下限可轻松实现0.01%。
QuantaLife 利用油包水微滴生成技术 开发了微滴式数字PCR技术,这也是**早出现的相对成熟的数字PCR平台,在运行成本和实验结果稳定性方面都基本达到了商品化的标准。2011年,QuantaLife 公司被Bio-Rad公司收购,其微滴式数字PCR仪产品更名为QX100型号仪继续在市场上销售,这个早期型号为dPCR概念的普及和应用领域的拓展发挥了重要作用。2013年该公司又推出了升级型号QX200。2012年,RainDance公司推出Raindrop型号数字PCR设备,这个设备将其原有的二代测序文库制备平台技术平移到数字PCR技术平台,在高压气体驱动下,将每个标准反应体系分割成包含100万至1000万个皮升级别微滴的反应乳液, 该公司的创始人之一Darren Link表示这种超高的微滴数目可以为用户“提供更高的检测动态范围,适用于处理更大浓度差异的不同样品”。微反应单元体积大小一致且稳定是泊松分布准确计算的前提。
*****的实时监控:已有数篇文章报道了使用数字PCR技术对患者***过程中的循环**DNA(ctDNA)进行检测,实时监控疾病进展。在非小细胞肺*、乳腺*和肠*等多种**患者中都取得了令人鼓舞的结果。与影像学及其他常规指标相比,ctDNA突变及丰度改变通?;崽崆笆鲁鱿郑庋涂梢蕴嵝岩缴笆钡髡?**方案,使患者得到更有效的***。无创产前筛查:唐氏综合征、地中海贫血或胎儿遗传性耳聋基因检测等,目前无创检测标本来源主要为孕妇血液,检测胎儿DNA会受到母体DNA的干扰,依靠数字PCR可提高检测准确性。对比NGS,数字PCR技术可以提高工作效率、降低检测成本。PCR 扩增和荧光信号分析。天津准确数字PCR经验丰富
良好的引物探针设计是数字PCR实验获得成功的关键因素之一。山东高精确度数字PCR经验丰富
乳腺*的分型:ER,PR和HER2是乳腺***常用的分子标志物,在患者在开始***之前必须要明确这几个分子标志物的具体状态。传统的检测方法是通过IHC来确定蛋白的表达情况,而HER2检测也还可以通过FISH来判断染色体的扩增情况。尽管相应的检测都有明确的指南来加以规范,但是在临床实践过程之中,有些检测结果不可避免的还是会受到人为操作和判读的主观影响,从而导致同一样本的结果偏差,为临床的治疗带来了极大的困惑。有研究者尝试采用四重数字PCR方法,对这几个标志物同时进行定量检测。95例石蜡标本的对比分析结果显示,HER2,ER和PR与IHC的一致性分别为96.8%,91.5%和85.1%,而ROC曲线下面积则分别为0.991,0.977和0.920,说明该方法与IHC方法有较好的一致性。此外,相比于IHC方法,数字PCR方法还具有操作和判读标准化、结果重复性好、检测周期短、标本使用量少等优势,未来在临床将会有很好的应用前景。山东高精确度数字PCR经验丰富