甲基化分析：DNA甲基化是哺乳动物DNA的一种常见表观遗传修饰，它通过调节细胞中的基因表达从而在发育和疾病过程中发挥了重要的作用。异常的DNA甲基化涉及整个基因组的整体低甲基化和位于基因启动子区域和基因间DNA的CpG岛的局部超甲基化，这是人类恶性**中一个常见的表观遗传改变。基于PCR的方法已经被***的应用于DNA甲基化的评估，其原理是先采用亚硫酸氢盐来处理DNA，这会通过脱氨基作用将未甲基化的胞嘧啶转换为尿嘧啶，然后设计与这些DNA进行特异结合的引物和探针进行扩增检测。然而，传统的PCR检测容易受到PCR抑制剂的影响，在非甲基化等位基因的背景下进行稀有甲基化等位基因检测的敏感性有限。而数字PCR是在无数个**的分隔之中进行反应，因此彼此之间较少受到抑制剂的影响，能够对传统方法检测不到的罕见甲基化等位基因进行精细的检测，未来有望将DNA甲基化作为一个具有区域性*变的预测指标或者**风险生物标志物来使用。基于单分子快速PCR扩增，进行核酸拷贝数定量的一种方法。PCR数字PCR专业服务

*****的实时监控：已有数篇文章报道了使用数字PCR技术对患者***过程中的循环**DNA（ctDNA）进行检测，实时监控疾病进展。在非小细胞肺*、乳腺*和肠*等多种**患者中都取得了令人鼓舞的结果。与影像学及其他常规指标相比，ctDNA突变及丰度改变通常会提前数月出现，这样就可以提醒医生及时调整***方案，使患者得到更有效的***。无创产前筛查：唐氏综合征、地中海贫血或胎儿遗传性耳聋基因检测等，目前无创检测标本来源主要为孕妇血液，检测胎儿DNA会受到母体DNA的干扰，依靠数字PCR可提高检测准确性。对比NGS，数字PCR技术可以提高工作效率、降低检测成本。浙江拷贝数变异数字PCR共同合作通过锁核酸修饰的引物增强了对互补序列的亲和力和特异性，即使是微小表达差异也可以轻松检测。

数字PCR技术的原理非常简单，然而在样品分散（divide）的环节上却遇到了无法突破的瓶颈。早期的dPCR尝试使用96孔板到384孔板甚至1536孔板作为分散反应的载体，或者采用类似流式技术的磁珠乳液扩增方法(BEAMing-Beads, Emulsion, Amplification, Magnetics)，2006年 Fluidigm公司推出了***台商品化的基于芯片的商品化数字PCR系统。2008年德国 Inostics 推出基于磁珠法乳浊液扩增和流式检测方式的BEAMing dPCR 检测服务，但这些方法无论在分散程度和数据群体的体量上都无法达到更加精细的要求，时间和耗材成本严重限制了dPCR技术的发展。

尽管dPCR被称作第三代PCR技术，但dPCR技术的广泛应用逐渐显现出一些不足之处。通量不高、操作复杂，同时成本**增加，dPCR似乎还没有找到相对qPCR足够的不可取代性优势。另一方面，dPCR增加了很多技术难点，如何制作成本低廉的芯片，如何集成液滴生成和PCR扩增，如何进行灵敏的信号检测和分析，如何提高自动化程度，实现Sample-In Result-Out。相较于Digital ELISA能够提高免疫检测的灵敏度到fg/mL级别，实现了高敏蛋白的检测，dPCR尽管发展更早，却难以取得Killer Application，或许这也导致了所谓的第三代PCR在很多人看来却没那么“下一代”。通常CT值大于30的时候，荧光定量qPCR的精确度和重复性会**降低，这个时候可考虑数字化PCR。

20 世纪末，Vogelstein等提出数字PCR(digital PCR，dPCR) 的概念，通过将一个样本分成几十到几万份，分配到不同的反应单元，每个单元包含一个或多个拷贝的目标分子( DNA 模板) ，在每个反应单元中分别对目标分子进行PCR扩增，扩增结束后对各个反应单元的荧光信号进行统计学分析。与 qPCR 不同的是，数字PCR不依赖于CT值，因此不受扩增效率影响，扩增结束后通过直接计数或泊松分布公式来计算每个反应单元的平均浓度(含量)，能够将误差控制在5%以内，数字PCR 可以不需要对照标准样品和标准曲线来实现***定量分析。低丰度DNA模板分子的精确定量。四川PCR数字PCR活动

原始数据中往往发现阳性信号与阴性背景之间存在许多弱阳性信号。PCR数字PCR专业服务

常规PCR和实时荧光PCR定量检测都需要已知拷贝数的标准DNA制定标准曲线，由于样品测定在各种条件上不会完全一致，会造成PCR扩增效率的差异，从而影响定量结果的准确性。而ddPCR不受标准曲线和扩增动力学影响，可以进行***定量。dPCR也有一些缺点，数字PCR系统成本高，通量有限、操作繁琐等不足。芯片式dPCR由于芯片加工成本高，系统复杂度高，使得商业化优势不是特别明显，特别是目前大多数分子诊断qPCR也能够很好的满足需求，dPCR增加的收益成本比并不算高。液滴式相对芯片式成本有所下降，但典型的液滴式dPCR液滴形成和PCR扩增和检测都分别在不同仪器中完成，增加了很多操作，也增加了系统的复杂性，从这点上看全自动荧光定量PCR做的更好。PCR数字PCR专业服务