芯片平台作为目前比较成熟的筛选工具,已经在很多领域有了相应的应用。多家芯片公司在DNA甲基化这块儿有了相应的产品提供,其中应用**为***的就Agilent平台和Illumina平台,相应的产品包括Agilent Human CpG Island Microarray Kit,Infinium HumanMethylation27 BeadChip和Infinium HumanMethylation450K BeadChip。另外Roche NimbleGen和Affymetrix也有相应的芯片推出,但是NimbleGen的芯片今年下半年已经停产不同的芯片平台,各自的实验过程也是不一样的。安捷伦前期采用的甲基化DNA免疫共沉淀(MeDIP)技术。将基因组DNA分成两份,一份用来做 MeDIP,另一份作为对照。两个样品都标记荧光(富集的样品用Cy5标记,对照用Cy3标记),然后与芯片杂交。芯片上每个探针的Cy5/Cy3强度比例显示出该区域的甲基化程度。ChIP-Seq 能实现真正的全基因组分析。上海MeDIP-SeqDNA甲基化方案
低甲基化,原*基因***正常细胞中,由于甲基化作用原*基因多处于沉默状态,但在多种**细胞中,均发现原*基因处于低甲基化状态,并且低甲基化状态与其蛋白表达升高密切相关,表明低甲基化状态可使原*基因***。转座子活化转座子是可移动的基因序列,包括LINE-1、HERV-K等,在人类基因组中含量丰富,正常情况下处于被甲基化状态而转录沉默。而在**细胞中,由于基因组总体甲基化水平的降低,这些序列也因去甲基化而活化,转移位置导致基因片段的插入和缺失。天津hMeDIP-SeqDNA甲基化欢迎咨询人类基因组有约56M的CpG位点,CpG岛约3万个。
NA甲基化(DNA methylation)是指在DNA甲基化转移酶(DNMT)催化下,以S-腺苷甲硫氨酸为甲基供体,将活性甲基转移至DNA链中特定碱基上的化学修饰过程。哺乳动物基因组中,DNA甲基化多发生在CpG二核苷酸中的胞嘧啶的5位碳原子。DNA甲基化是一种表观(epigenetic)修饰,它在不改变DNA序列的情况下,对个体的生长、发育、基因表达模式以及基因组的稳定性起到重要的调控作用,并且这种修饰在发育和细胞增殖的过程中是可以稳定传递的。近年来的大量研究表明,DNA异常甲基化与**的发生、发展、细胞*变有着密切的联系。
高通量BSP——目标位点/基因甲基化验证方案。科学方案:设计从项目背景了解、协助方案设计、实验材料选取、建库测序,到数据分析每个项目有特定的科学问题;需要专业、有价值的建议;科学、缜密的设计及时高效的沟通;以保障高质量研究成果。样本要求:基因组DNA:>=1ug(20个区域/位点);样品浓度>30ng/ul;无RNA和蛋白污染建库测序:测序策略:IlluminaHiSeq,PE150;测序深度:>100X。信息分析:基于靶向序列的甲基化分析,数据质控,5mCCalling,5mC在组间样本的可视化,多样本甲基化聚类与临床样本特征关联分析等。中小样本筛选, 大样本中进一步验证。
industryTemplate850K芯片为半金标准,价格低,分析简单,较为适合EWAS类型的课题。四川TAB-SeqDNA甲基化欢迎咨询
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上皮型钙黏附素(E-cadherin)是介导细胞间粘附的一种跨膜糖蛋白,其编码基因CDH-1属于**侵袭转移抑制基因。在**组织中,E-cadherin表达的下调或沉默可导致细胞间相互黏附力减弱,造成**细胞的分散,脱离原发灶处而转移。而E-cadherin下调的因素之一就是其启动子区域CpG岛的超甲基化。**细胞突破血管内皮及基底膜进入血循环是**细胞侵袭和转移的重要步骤。基底膜组成蛋白Nidogen的缺失将严重影响基底膜的完整性,有利于**细胞顺利通过进入血循环进而发生侵袭转移。有研究表明,Nidogen基因启动子在**细胞中表现出很高的甲基化水平,而在正常细胞中却极少或没有发生甲基化。另外,某些miRNA(如MiR-148a、miR-34b/c、miR-9)能够起到抑制**细胞生长和转移的作用,而在**细胞中,这些miRNA通常由于发生超甲基化而沉默。上海MeDIP-SeqDNA甲基化方案