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东莞细胞外泌体企业

来源: 发布时间:2023-07-09

外泌体蛋白质特征是:膜结合四跨膜蛋白(CD9、CD63、CD81和CD82),以及常规用于分离的EpCAM和Rab5。其他公认的蛋白质是受体(CD46和CD55)、热休克蛋白(HSP;Hsc70、Hsp70和Hsp90)、参与外泌体形成的蛋白质(Alix、TSG101)和负责融合和转运的膜蛋白(GTP酶、膜联蛋白和flotillin;ATP7A、ATP7B、MRP2、SLC1A4、SLC16A1和CLIC1)等。使用ELISA法检测这些标记蛋白可以用于确认外泌体的存在。也有相关研究称外泌体含有其他颗粒,如胆固醇(B淋巴细胞来源)、鞘脂、磷酸甘油酯和神经酰胺等。外泌体还运输形态发生素(Hedgehog、Wingless和Wingless-like),参与黑腹果蝇所描述的组织模式发育。外泌体可作为一种新型的疙瘩治着策略,例如外泌体特异性LncRNA干扰RNA技术。东莞细胞外泌体企业

外泌体的表征方法之微流体分析技术:微流体技术在外泌体研究方面也起着推动作用。微流体技术不只提供了高质量、高特异性的数据,并且试剂消耗量低,通量高.基于微流体技术的研究方法需要结合使用微流控芯片,微流控芯片通常由玻璃基和聚二甲基硅氧烷(PDMS)膜制成,包含许多尺寸适合所分析样品的微通道。主要区别在于芯片的内表面,可以通过多种方式对其进行功能化,例如通过涂层、多层沉积、电沉积和蚀刻.目前研究中针对不同的微流控表征方法,也制造了不同类型的微芯片,包括免疫芯片、磁性芯片和电化学芯片。外泌体及其蛋白质也可以通过比色法(标记抗体/ELISA)、直接荧光染色(DiO染料)、电化学性质变化和光学特别方法进行检测。对于结果评估,还需要额外的设备,例如读板器或荧光显微镜等。东莞血液外泌体分离费用外泌体不是干细胞,是干细胞较精华的部分。

差速离心法分离外泌体的实验原理:外泌体是一种小的(40-100nm)细胞外膜囊泡,目前进行外泌体分离的普遍方法是差速离心法。应用差速离心法和粒径分析等是细胞外囊泡(EV)研究的重要步骤。已知细胞会分泌许多膜囊泡,这些囊泡的大小、分子含量及其形成机制各不相同具体取决于细胞的类型和当前状态。通常可以辨别出三个主要的EV群体:凋亡小体、脱落的囊泡和外泌体.凋亡小体是已知较大的囊泡,直径为800-5000nm,由凋亡后细胞的细胞质和质膜成分组成。脱落的囊泡和外泌体由非凋亡细胞释放。脱落的囊泡,也称为“胞外体”或有时称为“微泡”,是由质膜起泡产生的,一般的粒径尺寸范围为(50–1000nm)。

分离外泌体的方法之超速离心:离心是一种利用不同的离心力根据颗粒成分的密度、大小和形状沉淀颗粒成分的过程。超速离心是一种离心过程,较多使用6×106g离心力,有助于隔离更小的组件,例如,核糖体、蛋白质、病毒、外泌体和其他EV。加速度(g)、旋转半径、样品粘度和沉降路径长度是有效分离外泌体的决定因素。20至250nm之间的粒径分数可以通过超速离心分离,随后的离心或尺寸排阻过程产生所需的外泌体。超速离心法被认为是外泌体分离的金标准方法,外泌体需要1×105至2×105g离心1小时。在顺序离心过程中,MVs、凋亡小体、细胞碎片、细胞和其他具有较高浮力密度的颗粒在外泌体之前沉淀。然而,必须注意的是,由于密度和大小重叠,大多数当前方法只能富集小EV(即外泌体)。手动超高速离心和自动化离心仪器的分离效果可能存在差异。

外泌体的构成:除了RAB蛋白,外泌体中富含具有外泌体膜交换以及融合作用的膜联蛋白(包括膜联蛋白1、2、4、5、6、7、11等)。外泌体膜上富含参与外泌体运输的四跨膜蛋白家族(CD63,CD81和CD9)、热休克蛋白家族((HSP60,HSP70,HSPA5,CCT2和HSP90以及一些细胞特异性的蛋白包括A33(结肠上皮细胞来源)、MHC-Ⅱ(抗原提呈细胞来源)、CD86(抗原提呈细胞来源)以及乳凝集素(不成熟的树突状细胞)。其它一些外泌体中的蛋白包括多种的代谢类的酶(烯醇化酶1,醛缩酶1,PKM2,PGK1,PDIA3,GSTP1,DPP4,AHCY,TPL1,抗氧化蛋白,P4HB,LDH,亲环素A,FASN,MDH1和CNP)、核糖体蛋白(RPS3)、信号转导因子(黑色素瘤分化相关因子,ARF1,CDC42,人类红细胞膜整合蛋白,SLC9A3R1)、粘附因子(MFGE8、整合素)、细胞骨架蛋白以及泛素等。外泌体可以传递生物分子,例如蛋白质、DNA、mRNA等,影响接收器细胞的表现型和生理活性。郑州细胞外泌体分离多少钱

外泌体携带的小分子物质(如ATP、GTP等)参与细胞生命活动、代谢、细胞生长和分化等生物学进程。东莞细胞外泌体企业

外泌体分离方法之尺寸排阻层析法:尺寸排阻层析法也被称为凝胶过滤层析法,这种方法是基于凝胶孔的大小和外泌体的大小,大于凝胶孔径的颗粒被洗脱;反之,小于凝胶孔径的颗粒将被抑制。凝胶过滤层析分离法总体上能获得较高的纯度和产量。建议与超滤相结合,这种方法可提供更少的蛋白质污染和更高的外泌体回收率。凝胶过滤层析分离法的缺点是凝胶的成本过高。外泌体分离方法之声学流体分离:声学流体分离技术利用声场根据粒子的大小、密度和可压缩性来分离粒子。生物样品在此过程中不会受到损坏,并且分离的本身是非接触式、高效的和无标记的。东莞细胞外泌体企业

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