核酸提取，是分子生物学中较常见的基本操作，一般分为DNA提取与RNA提取，提取核酸的质量直接影响后续的检测工作，暂对常见的问题进行了一个总结。DNA提取：1.A260/280比值较低？或者A260/280比值较高？用水作为洗脱液比较偏低，或者蛋白质残留，但如果操作过程中使用了苯酚，则更可能是苯酚残留。而比较高可能是大量RNA残留，没有使用RNaseA，或RNaseA活性下降。A260值提示的含量与电泳检测时提示的含量有可见的误差则为苯酚残留。DNA提取需要通过添加蛋白酶消化蛋白质。深圳血液DNA提取哪家划算

RNA提取和DNA提取实验中常见问题及过程中的注意事项：降解：降解问题是RNA制备中常常到的问题。因为在RNA提取过程中，样品储存不当或裂解效率低等情况都会导致降解。对于DNA提取，降解不是一个大问题，因为对于PCR，DNA可以被剪切并且工作正常，如果不希望有较多剪切的DNA，可以使用弱裂解的方法。PCR清理时的注意事项：PCR净化其实并不是DNA提取技术本身，但它是一种效率高且简单的技术，它只是添加高浓度的结合盐（通常每体积PCR反应3-5体积盐）和离心来过滤。在实验过程中，PCRClean-up试剂盒出现故障也会导致整个实验功亏一篑。因为在PCR反应中有较多吸收260度紫外线的物质，比如：核苷酸、去污剂、盐和引物。所以，PCR净化试剂盒经常无法正常工作可能是由于PCR反应失败所造一般成较难清理。北京血浆DNA提取公司DNA提取后可以用于PCR扩增、测序、基因编辑等多种应用。

RNA提取一般在pH值低于7时进行。在碱性pH值下，由于核糖的2'位置存在OH基团，RNA更容易被碱性水解降解。此外，RNA在酸性pH值下倾向于保留在水相中。外泌体DNA提取注意事项：1.实验过程中较好戴一次性干净手套、口罩，使用超纯水。2.如样本量不足200μL，请用0.85%生理盐水补至200μL。RNA提取中常见的问题之RNA中有基因组DNA污染：材料中核酸含量高：脾脏、胸腺等组织中的核酸含量较高，可进行多次酚/氯仿抽。提以去除多余的DNA。也可以在提取后加入DNaseI处理，降解DNA。材料过量：增加试剂用量。

DNA提取试剂盒的保存方式：室温。低温保存可能会有沉淀析出。如果发生析出现象，请于50℃溶解后，再于室温保存。DNA提取试剂盒主要可以分为以下几大类：小量全血基因组DNA提取试剂盒、中量全血基因组DNA提取试剂盒、组织/细胞基因组DNA提取试剂盒、中量/大量组织/细胞基因组DNA提取试剂盒、全血/组织/细胞基因组DNA提取试剂盒、CTAB植物基因DNA提取试剂盒、新型植物基因组DNA提取试剂盒、酵母基因组DNA提取试剂盒、M13噬菌体单链基因组DNA提取试剂盒。RNA提取需要保持样本的完整性和纯度，以避免污染或降解。

RNA提取：1.冻存细胞与新鲜细胞的RNA提取有区别吗？具体该怎么操作？新鲜细胞与冻存细胞RNA提取没什么区别。千万不能等细胞溶解了存状态把Trizol直接加到冻存管了，一起化开，振荡振荡就可以了。与从组织中提RNA差不多。2.RNA得率低:该组织或者细胞中RNA含量偏低：不同细胞和组织中RNA的丰度不同，如肝脏，胰腺，心脏等是高丰度组织(总RNA含量2-4μg/mg)，脑，胚胎，肾脏，肺，胸腺，卵巢等是中丰度组织(总RNA含量0.05-2μg/mg)，膀胱，骨，脂肪等是低丰度组织(总RNA含量<0.05μg/mg)。组织起始量太少或者太多：样品量过少，则细胞组织中RNA含量较低；样品量过多则可能超过裂解液的裂解能力，裂解将不完全，从而导致RNA得率低。DNA提取的样品准备之生物组织：组织匀浆法。宁波离心柱法RNA提取公司

DNA提取需要脂质被洗涤剂和表面活性剂分解。深圳血液DNA提取哪家划算

RNA提取的一些问题，RNA降解：提取的材料不新鲜。新鲜组织取得后应立即置于液氮中或立即放入RNAstore试剂中，以保证提取效果。处理样品量过大。污染了RNase。虽然试剂盒中提供的缓冲液都不含RNase，但使用过程中很容易污染RNase，应小心操作。碱裂解法提取的质粒DNA进行琼脂糖电泳进行鉴定时，看到的三条带分别是什么？碱法抽提得到质粒样品中不含线性DNA，得到的三条带是以电泳速度的快慢排序的，分别是超螺旋、开环和复制中间体（即没有复制完全的两个质粒连在了一起）。如果你不小心在溶液II加入后过度振荡，会有第四条带，这条带泳动得较慢，远离这三条带，是20-100kb的大肠杆菌基因组DNA的片断。深圳血液DNA提取哪家划算

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