外泌体衍生物miRNA的重要应用：外泌体保护miRNA免于降解，使它们比游离miRNA更稳定，并能被特定受体细胞有效整合。因此，在外泌体携带的货物中，miRNA可以提供有关它们来源的细胞类型、靶标和细胞状态的身份信息。越来越多的证据表明，疙瘩细胞来源的外泌体已成为通过传递病miRNA促进疙瘩细胞增殖、侵袭、血管生成、远处转移和疙瘩微环境重塑的主要候选者。血管生成对于恶性疙瘩的生长和转移至关重要，因为新血管可以提供额外的氧气和营养物质，还可以清理废物。比如：病细胞释放外泌体exo-miR-21、exo-miR-23；外-miR-29；exo-miR-103和exo-miR-210可以促进增殖、血管生成和疙瘩转移。外泌体分离的方法会影响外泌体样品的质量和数量。东莞快速提取外泌体分离公司

外泌体是由细胞分泌的包含RNA和蛋白质的小囊泡，普遍存在于血液、唾液、尿液及乳汁等体液中，具有细胞信使功能，参与细胞通讯。外泌体是目前为止定义较为明确的细胞外囊泡(ExtracellularVesicles,EVs)，其生成过程、释放途径、大小及功能区别于微囊泡(Microvesicles)和凋亡小体(Apoptosisbodies)。外泌体是内吞起源的小(40–100nm)囊泡群。外泌体和脱落的囊泡都含有特定的蛋白质组、RNA和,dsDNA等。不同的细胞外环境富含不同类型的细胞外囊泡。即使由相同的细胞类型形成，不同类别的囊泡也具有不同的核酸特征。分离外泌体的方法：细胞碎片、凋亡体、外泌体和其他EV一起存在于生物体液中，具有密度、形状、大小和表面蛋白等物理性质的外泌体是分离机制的基础。结合两种或多种分离方法有助于有效地将外泌体与其他干扰成分分离。东莞快速提取外泌体分离公司超高速离心是常用的外泌体分离方法之一。

外泌体分离方法之过滤法：超滤膜也可用于外泌体的分离。根据微泡的大小，使用超滤膜过滤的方法可以将外泌体与蛋白质和其他大分子分离。外泌体也可以通过多孔结构捕获它们来分离。常见的过滤膜孔径为0.8m、0.45m或0.22m，可用于收集大于800nm、400nm或200nm的外泌体。比如微柱多孔硅纤毛结构一般用于分离40-100nm外泌体。在初始步骤中，去除较大的囊泡。在接下来的步骤中，外泌体会群集中在过滤膜上。隔离步骤相对较短，但该方法需要用PBS缓冲液对硅结构进行预孵育。除标准过滤技术外，切向流过滤在有效分离外泌体方面也有着尝试应用，通过切向流过滤技术去除游离肽和其他小化合物从而分离具有确定大小的外泌体。此外，在体外研究和脂肪组织中，也会采用超滤与SEC的结合的方式来分离外泌体。通过(a)对片上过滤器施加压力或(b)产生电场，迫使外泌体穿过多孔膜，结合错流和电泳分选来完成筛分。

外泌体分离方法之亲和层析分离法：在亲和层析分离法方面，主要使用凝集素和合成Vn(venceremin)肽。凝集素将结合存在于外泌体表面的糖基化蛋白质，从而使外泌体沉淀。Vn肽分离技术基于其对含有HSP的细胞外颗粒的高亲和力。然而，这种方法比较容易使提取物被膜表面上含有上述标记物的细胞和其他颗粒污染。外泌体分离方法之介电泳分离法：介电泳分离法主要利用不同大小的粒子在不均匀电场中的位置差异。外泌体被吸引到高电区域，而较大的颗粒将位于低电区域。该方法速度快，适合用于高通量筛选，但缺点是需要加热。未来可开发更加高效和精确的外泌体分离和检测技术。

外泌体的表征分析：Zeta电位：通过电泳光散射(ELS)测量的Zeta电位测量粒子在电泳场中的速度。Zeta电位是胶体分散体稳定性的指标（非常值）和囊泡表面电荷的量度（+或-符号）。电子显微镜分析：对于电子显微镜分析，外泌体制剂在PBS缓冲液中按1:10稀释，随后在等体积的4%(w/v)多聚甲醛和1%(v/v)戊二醛中固定5分钟。然后将样品置于formvar-carbon涂层的600目铜网格上，并在室温下干燥5分钟。随后将样品在乙酸双氧铀溶液（2%水溶液）中进行对比，并在电子显微镜（Jeol1230TEM）下观察，加速电压为80kV，并连接到数码相机进行观察。外泌体分离是外泌体研究中的重要步骤。宁波血液RNA外泌体分离企业

外泌体分离器材的选择也对分离结果有一定的影响。东莞快速提取外泌体分离公司

外泌体分离方法之超速离心法：超速离心基于颗粒的大小（重量）及其在离心力（100,000–110,000×g）下的离心沉降。至于去除的细胞碎片和不需要的颗粒可以通过称为差速离心的几步慢速离心来获得。外泌体的纯化可以采用蔗糖梯度密度离心纯化法：即：在蔗糖梯度(1.13–1.19g/mL)或缓冲液中进行，以实现更高的富集、产量和纯度增加。外泌体分离方法之微流控分离法：微流控分离法主要是在微芯片上进行的，这里我们需要提及的是，微流控分离法法可用于外泌体分离（免疫结合和磁结合、过滤），效率相对较高（约90%）。东莞快速提取外泌体分离公司

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