超微量分光光度计主要是用来快速检测一些样品,比如蛋白、核酸等,几乎每一个分析实验室都离不开分光光度计,那么,超微量分光光度计怎么使用呢?***小编就Micro Drop为例,给大家介绍一下超微量分光光度计使用方法。
在此之前,我们先来了解一下超微量分光光度计的原理,微量分光光度计是利用光源通过光片调整光坡长,射入样品液体中,再射入光电检测器将光能转换成电讯号。由样本及空白水样间所吸收之光能量差,与标准液之能量吸收值相比较,便可定样本中待测物浓度。Micro Drop为一款全光谱波长超微量分光光度计,适用于更宽浓度范围的样品检测,操作简便,即擦即测。
蛋白质在280nm波长处有较大吸光值。上海双检测模式超微量分光光度计探针检测
Micro Drop蛋白质检测功能:
Protein Bradford检测方式:
Bradford是常用的蛋白定量检测的方法。它通常用于浓度比较低的蛋白的浓度检测。与其他比色法一样,Bradford法检测蛋白浓度时必须构建一个标准曲线。
Bradford法是根据蛋白质在酸性溶液中,能够使考马斯亮蓝结合,使得染料的比较大吸收峰值变更为595nm来检测蛋白浓度。检测蛋白-染料复合物在595nm处的吸光值,并在750nm处做基线校正,计算得出蛋白的浓度。
常规检测使用试剂/蛋白样品的体积比为50:1,检测浓度范围为0.10mg/ml到8.0mg/ml(BSA),比较好线性浓度范围在0.01-1mg/ml。当使用基座检测时,推荐使用4μl样品和200μl Bradford试剂。
微量检测使用试剂/样品的体积比为1:1,可以检测蛋白浓度范围从15ug/ml至125ug/ml。要准备足够的样品来做基座检测,建议使用10μl样品和10μlBCA试剂(使用PCR管)。
按照试剂盒生产厂家的说明来准备标准品和和构建标准曲线。确保在所有检测过程中,每个样品的处理时间及环境温度一致。
贵州双检测模式超微量分光光度计核酸检测超微量分光光度计已成为现代分子生物实验室常规仪器。
Micro Drop为一款全波长(185~910nm)超微量紫外可见分光光度计,不仅提供了便于测量小剂量样本的基座模式,也可以使用传统的比色皿来进行样本检测。
基座模式下,本产品可以检测0.5-2μl的样本,而且检测具有非常高的准确性和重复性。使用基座模式检测样本时,样本保留系统应用了表面张力来把样本保留在两根检测光纤中间,这使得仪器可以检测较高浓度的样本而不用稀释,测量浓度范围可达普通分光光度计检测浓度范围的200倍,且可实时调控光纤之间的液柱高度,以获得更准确的检测数据。相对于传统的比色皿检测方法,基座模式免去了复杂的比色皿清洗过程,只需使用无尘纸擦拭,清理简便。另外,对于浓度低、易挥发或者表面张力比较低不易形成液柱的样品,可以使用比色皿进行测量。
开机后,按钮亮起并持续保持光亮,在检测过程中,按钮指示灯会闪烁表示仪器正在运行中。本产品无需预热,即可直接进行测量,操作简单,快捷,且软件可以直接给出浓度值。此外,本产品体积小,质量轻,便于携带。
Micro Drop细胞检测功能:
细胞检测是使用分光光度计检测光透过细胞悬液的散射光,得出对应吸光值。对于Micro Drop而言,基座检测和比色皿检测之间比较大的不同是光程不一样,光谱图显示的是从250nm到700nm范围内的光谱检测结果。
样本均一性:在检测前要确保样品的均一性,使用基座检测前要把样品混合均一再加到基座上检测,使用比色皿检测时可以使用搅拌功能。
检测范围:由于采用了比较短的检测光程,Micro Drop可以检测比较高浓度的细胞悬液。由于可以显示较**段的光谱。比较稀的样品可以在较低的波长下检测,比如说可以在400nm处检测。用户还可以使用比色皿来检测比较稀的样品。
检测基座的消毒:如果需要消毒,请使用消毒液,如可以使用0.5%的次氯酸钠来清洁基座,以保证基座上没有生物活性物质残留。
A320nm 或A340nm——是基线校准波长,为检测溶液样品的浊度和其他干扰因子。
超微量分光光度计的应用:
(一)核酸的定量:
核酸的定量是超微量分光光度计使用频率比较高的功能??梢远咳苡诨撼逡旱墓押塑账?,单链DNA、双链DNA,以及RNA。核酸的比较高吸收峰的吸收波长260nm。每种核酸的分子构成不一,因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸,事先要选择对应消光因子。如:1OD的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA,37μg/ml的ssDNA,40μg/ml的RNA,30μg/ml的Olig。测试后的吸光值经过上述系数的换算,从而得出相应的样品浓度。除了核酸浓度,分光光度计显示几个非常重要的比值表示样品的纯度,如A260/A280的比值,用于评估样品的纯度,因为蛋白的吸收峰是280nm。纯净的样品,比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低于1.8或者2.0,表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。A230表示样品中存在一些污染物,如碳水化合物,多肽,苯酚等,较纯净的核酸A260/A230的比值大于2.0。
每种核酸的分子构成不一,因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸,事先要选择对应消光因子。天津高灵敏度超微量分光光度计探针检测
Micro Drop超微量每次测量完毕后,用蒸馏水清洁上下光纤端面。上海双检测模式超微量分光光度计探针检测
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