发酵培养基为:葡萄糖80g/l,酵母浸膏20g/l,k2hpo42g/l,mgso4·7h2o50mg/l,cecl30-40mg/l,mnso4·h2o3mg/l,feso4·7h2o3mg/l,vb110mg/l,生物素7μg/l;发酵工艺同实施例1,100l发酵罐中含有70l发酵培养基。设置cecl3的添加浓度为0,,如图1-2所示,随着cecl3添加量的增加,菌体浓度和谷氨酸含量均有所提升,当添加量为10mg/l时,菌体浓度和谷氨酸含量达到峰值,然后出现下降趋势,但是整个过程中,糖酸转化率没有明显改变(附图未显示);说明cecl3稀土盐能够促进菌株增殖,提高谷氨酸相关合成酶的活力,提高谷氨酸的产量,但是过高的浓度会造成菌株增殖放缓和死亡,谷氨酸产量相应下降。二、通过上述实验确定cecl3添加量为10mg/l,在此基础上,研究2-羟基乙胺对菌体浓度、谷氨酸含量以及糖酸转化率的影响。设置2-羟基乙胺的浓度为,5,10,20,40,80,160mg/l,如图3-4所示,随着2-羟基乙胺添加量的增加,菌体浓度随之增加,相应地,谷氨酸含量和糖酸转化率也有所提升,当添加量为40mg/l时,菌体浓度和谷氨酸含量达到峰值,继续增加2-羟基乙胺的浓度,产生明显的抑菌效果,菌株密度下降明显;原因是,低浓度的2-羟基乙胺可能促进磷脂酰乙醇胺细胞壁组分的合成。F12培养基提供了丰富的营养支持。上海RPMI1640培养基
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cs液体培养基和1/2cs液体培养基在用不同ph超纯水(ph为)配制时的ph都较为稳定,在未调ph的情况下,可直接用于多种植物培养。如图8所示。(2)以克新18号马铃薯无菌苗为例,观察在未调ph和将ph调至:a、培养基制作方法:随机选取超纯水,测得其ph为,用于配制8种不同的液体培养基。第一种:1/2ms未调ph液体培养基,其为取1/2ms基本培养基置于ph为;第二种:1/2cs未调ph液体培养基,其为取1/2cs基本培养基置于ph为;第三种:ms未调ph液体培养基,其为取ms基本培养基置于ph为;第四种:cs未调ph液体培养基,其为取cs基本培养基置于ph为;第五种:1/,其为取1/2ms基本培养基置于ph为,调ph至;第六种:1/,其为取1/2cs基本培养基置于ph为,调ph至;第七种:,其为取ms基本培养基置于ph为,调ph至;第八种:,其为取cs基本培养基置于ph为,调ph至。b、培养方法:从培养实例4所述培养基获得长势**的马铃薯幼苗,在清水中缓苗2-3d后选取长势一致的马铃薯幼苗,如图9-a所示,置于上述8种不同液体培养基8d,每隔2d更新1次液体培养基;于温度22-23℃、湿度50-70%、光照强度2000-3000lux、光照和黑暗交替(光照时间14h、黑暗时间10h)条件下培养。
3)培养方法:将配制的1/2cs生长培养基分装于长、宽、高9cm的耐高温培养盒中,用移液枪吸取带有无菌水的无菌种子,吹打在无菌滤纸上,用无菌尖头镊子将种子均匀点播在培养基上;于温度22-24℃、湿度50-70%、光照强度1500-2000lux、光照和黑暗交替(光照时间16h、黑暗时间8h)条件下培养。(4)1/2cs生长培养基的培养结果为:哥伦比亚型拟南芥种子在1/2cs生长培养基上的萌发率为100%,培养16d的幼苗,表现为植株健壮,莲座叶均已伸展,叶色浓绿,根系发达、平均主根长为。如图1所示。对比培养例1:将1/2cs基本培养基替换为1/2ms基本培养基,其余完全同培养实例1,1/2ms基本培养基的成分及用量如表1所示。1/2ms生长培养基的培养结果为:哥伦比亚型拟南芥种子在1/2ms生长培养基上的萌发率为100%,培养16d的幼苗,表现为植株健壮,莲座叶部分伸展,叶色浓绿,根系发达、平均主根长为。如图1所示。培养实例1和对比培养例1的培养结果比较:哥伦比亚型拟南芥在1/2cs生长培养基和1/2ms生长培养基上的萌发率均为100%;在相同条件下培养16d时,与1/2ms生长培养基相比,1/2cs生长培养基中的幼苗长势更佳,主要表现为莲座叶长势更好、根系更为发达。如图1所示。无酚红培养基确保了实验结果的准确性。
若应用于植物培养中的液体培养基制作,可不用调节ph,用超纯水(ph为)充分溶解后定容,便可直接应用于大多数植物水培。培养实例1:哥伦比亚型拟南芥无菌苗培养(1)种子保存及消毒方法:a、拟南芥种子保存方法:哥伦比亚(col,columbia)型拟南芥种子成熟后,收取种子于,加入3-8颗变色**干燥剂,用封口膜密封后置于4℃长期保存;b、拟南芥种子**消毒方法:取出经低温干燥保存的种子,于无菌环境下,将适量种子置于无菌,加入适量体积的无菌水,将离心管颠倒几次后用低速离心机离心10s,小心倒掉上清,重复3次;加入75%酒精,将离心管颠倒几次后用低速离心机离心10s,小心倒掉上清;用无菌水清洗3次,低速离心10s后去除上清;加入适量体积的5%naclo溶液,将离心管上下颠倒10-20次,低速离心10s后倒掉上清,重复2次;用无菌水清洗3次,低速离心10s后去除上清;加入无菌水,使种子完全浸泡在无菌水中,于4℃放置48h后播种。在种子质量良好的情况下,利用上述方法保存及消毒的无菌拟南芥种子,萌发率极高且几乎同时出苗。(2)生长培养基配制:1/2cs基本培养基+蔗糖30g/l+植物凝胶8g/l,用超纯水溶解,。1/2cs基本培养基的成分及用量如表1所示。。无酚红培养基在细胞实验中减少了不必要的干扰。云南DMEM高糖培养基生产企业
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