一些实现空间转录组学的重要技术,**早可以追溯到二十世纪七十年代,长期以来,各种形式的原位杂交技术(ISH)已用于可视化空间中的基因表达。从技术原理中不难看出,空间转录组技术**为特殊的载玻片。ISS 方法通常通过基于连接(SBL)或者基于合成(SBS) 的原位测序, 确定靶向基因序列或非靶向的 cDNA 短片段,**终获得空间转录组信息。根据测序链接策略的不同(SOLiD,cPAL和SEDAL),基于 SBL 的原位测序技术方法的代表性技术分别为 FISSEQ,ISS,STARmap。欧易生物具有上百例空间转录组项目执行经验,致力通过质量的服务,助力各位科研工作者取得新的突破。吉林欧易生物空间转录组使用
BayesSpace是一种基于空间转录组模型的聚类方法,通过对基因表达矩阵的低维表示进行建模并通过空间先验鼓励相邻点属于同一簇来实现空间聚类。与以前的方法相比,BayesSpace允许对聚类结构和错误项进行更灵活的规范。BayeSpace通过***使用的Bioconductor SingleCellExperiment数据结构将预处理数据作为输入,无缝集成到空间转录组分析工作流中,输出同样存储在SingleCellExperiment对象中,该对象可用于下游分析。BayesSpace增强的空间聚类提供了一个更高分辨率的组织类型图。值得注意的是,增强后的空间聚类识别了沿**边界的淋巴组织区域和可能的免疫浸润到**中的区域,这些区域在原来的分辨率下是无法辨别的。重庆空间转录组报价早期空间转录组学的另一条发展路线是基因捕获和增强子捕获筛选。
空间转录组技术包含两种芯片,分别为组织优化芯片(Tissue Optimization)和基因表达芯片(Library Preparation)。组织优化芯片用来摸索组织透化的比较好时间,基因表达芯片用来进行正式样本的空间转录组实验。其中基因表达芯片上有 4 个捕获区域,每个区域大小为 6.5mm×6.5mm,每个捕获区域中有 5000 个带有特异地址序列的探针簇,称为 barcoded spots,每个 spot 直径为 55um,包含数百万个用于捕获的 oligo 探针序列,相邻两个 spot 的中心距离为 100um。探针序列的结构为:测序引物结合序列,16nt 的位置序列,12nt 的 UMI 序列以及 30nt 的 oligo-dT 序列。
转录本的空间位置信息可以通过在原位阵列上捕获的组织切片中的转录本来获取,目前已有多种技术策略被开发报道, 如空间转录组技术(Spatial Transcriptomics,ST)和 Visium 技术,通过将包含空间位置信息的条形码、UMI 标签、poly-dT 的探针固定在商用微阵列载玻片上,来捕获包含 poly(A) 尾巴的转录本,并获取全转录组水平的基因表达及位置信息。一些无需成像即可计算重建空间基因表达模式所需信息的技术也被开发了出来,其中之一就是是 DNA 显微技术,它记录 cDNA 之间的接近度,该信息可用于重建转录本之间的相对位置。空间转录组避免了组织中细胞位置信息的丢失。
空间转录组数据分析的重要是根据每个芯片上每个spot的基因表达信息进行聚类,然后将spot根据坐标位置序列放回到组织的图像上,同时可以对每个gene在组织上表达的空间位置进行定位。获得测序数据后,首先利用Space Ranger 软件可以自动化的对图像进行处理、数据比对和Barcode处理。另外一个软件Loupe Cell Browser是一个适用于Windows和MacOS的桌面应用程序,它可以快速、轻松地可视化和分析10X Visium数据。欧易生物具有上百例空间转录组项目执行经验,致力通过质量的服务,助力各位科研工作者取得新的突破。空间转录组技术重点为特殊的载玻片。吉林欧易生物空间转录组使用
有很多其他类型的分析可用于空间转录组学数据,包括基因模式的识别,空间区域的转录组定义等。吉林欧易生物空间转录组使用
空间转录组研究的的必要性。研究单细胞我们想要探究细胞间的异质性,但是常规的单细胞是将细胞解离成单细胞悬液,然后利用单细胞分离技术(微孔,微板,液滴)等方法实现单细胞建库,这里比较大的问题是是细胞失去了原本在组织的空间信息。然而这个空间信息在实际研究中有很重要。特别是在研究细胞命运机制及细胞谱系发生空间位置的信息显得尤为重要,因此发展空间转录组技术实现细胞的位置信息的保留,对研究此类细胞状态尤为必要。吉林欧易生物空间转录组使用
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