空间转录组的方法和技术有哪些?广义上讲,现有的生成空间分辨转录组学的方法可分为四类:用于空间重建的计算策略和组学实验的组合,使用激光捕获显微切割(LCM)结合高通量进行直接测量,使用荧光物质的基于图像的原位转录组学 ,以及基于寡核苷酸的空间条形码再加上高通量。每种方法都有其优点和缺点。空间重构的计算策略:这种计算方法可以充分利用内在基因表达模式或共表达的趋势,从单个细胞的大量转录组数据中重构细胞间的环境。然而,这些推论方法在某些情况下*呈现空间趋势或特定组织的总体布局。基于LCM的方法:基于LCM的转录组学或基因组学成功地获得了单个细胞的空间转录组,尽管其通量很低,但是在可以标记成千上万个单个细胞位置的多路复用条形码策略可行之前,将少量细胞的数据粗略地整合到构成***的巨大背景中,可能具有一定价值。基于图像的原位转录组学:基于图像的原位转录组学在很大程度上增加了可检测区域,但也存在一些问题,例如几种smFISH方法很难从包括信号干扰、转录本积累等复杂背景中提取单个细胞。空间条形码加高通量:费用较高且无法在单个细胞中获得转录组。空间转录组学和 10X Visium 依靠这种微阵列技术,区别在于微阵列载玻片上的组织上的转录本信息。福建空间转录组价格
空间转录组是在组织原位检测基因表达的一种技术,与bulk RNA-seq或单细胞转录组测序相比,空间转录组避免了组织中细胞位置信息的丢失,使得我们在检测基因表达的同时获得基因在组织内部的空间位置信息。正是由于空间转录组可以从多维度解析生物学过程的特点,近年来关于空间转录组无论是在技术开发,还是大规模应用或商业化,都得到蓬勃发展。例如2019年4月,Science发文通过空间转录组揭示ALS(肌萎缩侧索硬化症,又称渐冻症)分子病理的时空动态;2019年8月,Nature在线发表了景乃禾团队解析小鼠早期胚胎细胞的时空表达数据;2020年9月,Cell上发表了一篇利用空间转录组解析人鳞状细胞*的文章;2021年1月,Science发表了将组织扩展和原位RNA测序结合起来的新型空间转录组技术ExSeq;2021年4月,10x Genomics公司宣布了新一代FFPE空间转录组商业化解决方案。浙江空间转录组价格空间转录组细胞通讯分析方法简介及实操。
有哪些技术手段可以进行空间转录组研究?已发表的关于空间转录组技术有Slide-seq , LCM-seq , seqFISH, MERFISH , Liver single cell zonation , Geo-seq and Tomo-seq。这些方法或是在细胞数量上限制较大,或是存在有效测序深度不足等问题。10x Genomics公司提供的Visium空间基因表达解决方案是目前较好的一个高通量空间转录组的商业化解决方案。该解决方案可以轻松地将空间转录组学技术应用到组织切片和染色的标准方法中,从而研究空间分辨率下整个转录组mRNA的表达情况,同时在同一组织切片中获得组织学相关信息。
空间转录组的应用有哪些?一、发现疾病的空间异质性:同时了解患病组织中的细胞类型及其定位有助于解决空间分辨的转录组学问题。在不同的环境下,明智地选择这些方法在生物学研究中也是至关重要的,例如在神经科学中,基于FISH的方法很普遍;基于LCM的方法适用于小样本(例如临床样本)以及整个转录组或基因组分析。二、构建空间转录组图谱:借助于空间分辨的单细胞转录组学,建立图谱可能是在分子水平上研究生物体结构的重要步骤。目前的多项研究通过单细胞转录组技术结合空间转录技术,得到多个***的时空转录组图谱(相关研究后续会在如下专辑更新)。除大脑以外的其他***的技术现代化,将为开发有用的空间转录组学地图集提供广阔的前景。
10x Genomics空间转录组用于文库构建的每张载玻片上有四个捕获区域,每个捕获区域的大小为6.5x6.5mm,包含5000个被条形码标记的点(barcoded spots),每个点的直径为55 μm,点和点之间中心的距离为100 μm,并且每个点都有一个barcode序列。组织切片的细胞中会释放出mRNA,迁移到每个spot的mRNA会被标记上相应的barcode序列,然后进行文库构建并进行测序。根据数据的条形码信息对数据进行分析,以确定哪些数据来自哪个位置,从而实现空间基因表达的可视化。欧易生物具有上百例空间转录组项目执行经验,致力通过高效的服务,助力各位科研工作者取得新的突破。该类工具的开发将简化不同类型空间转录组学数据的整合和分析。湖北空间转录组价格
10X Genomics 继单细胞测序后也推出了空间转录组测序技术。福建空间转录组价格
空间转录组技术包含两种芯片,分别为组织优化芯片(Tissue Optimization)和基因表达芯片(Library Preparation)。组织优化芯片用来摸索组织透化的比较好时间,基因表达芯片用来进行正式样本的空间转录组实验。其中基因表达芯片上有 4 个捕获区域,每个区域大小为 6.5mm×6.5mm,每个捕获区域中有 5000 个带有特异地址序列的探针簇,称为 barcoded spots,每个 spot 直径为 55um,包含数百万个用于捕获的 oligo 探针序列,相邻两个 spot 的中心距离为 100um。探针序列的结构为:测序引物结合序列,16nt 的位置序列,12nt 的 UMI 序列以及 30nt 的 oligo-dT 序列。福建空间转录组价格
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