欧易生物自引进10x Visium空间转录组以来已经完成了上百例样本测序，在样本包埋、切片、实验和数据分析上积累了大量宝贵的经验。本次培训班旨在跟广大科研工作者介绍空间转录组的研究热点和方案设计，分享欧易生物在样本处理、实验和数据挖掘上的成功经验，助力各位科研工作者取得新的突破。招生对象：A、对空间转录组感兴趣，期望了解空间转录组技术，或近期准备开展空间转录组测序项目B、项目已经开展，需要深入挖掘数据的科研工作者。空间转录组样本的组织切片的细胞中会释放出mRNA，迁移到每个spot的mRNA会被标记上相应的barcode序列。黑龙江宣传空间转录组

空间转录组的方法和技术有哪些？广义上讲，现有的生成空间分辨转录组学的方法可分为四类：用于空间重建的计算策略和组学实验的组合，使用激光捕获显微切割（LCM）结合高通量进行直接测量，使用荧光物质的基于图像的原位转录组学 ，以及基于寡核苷酸的空间条形码再加上高通量。每种方法都有其优点和缺点?？占渲毓沟募扑悴呗裕赫庵旨扑惴椒梢猿浞掷媚谠诨虮泶锬Ｊ交蚬脖泶锏那魇疲拥ジ鱿赴拇罅孔甲槭葜兄毓瓜赴涞幕肪?。然而，这些推论方法在某些情况下*呈现空间趋势或特定组织的总体布局。基于LCM的方法：基于LCM的转录组学或基因组学成功地获得了单个细胞的空间转录组，尽管其通量很低，但是在可以标记成千上万个单个细胞位置的多路复用条形码策略可行之前，将少量细胞的数据粗略地整合到构成***的巨大背景中，可能具有一定价值。基于图像的原位转录组学：基于图像的原位转录组学在很大程度上增加了可检测区域，但也存在一些问题，例如几种smFISH方法很难从包括信号干扰、转录本积累等复杂背景中提取单个细胞?？占涮跣温爰痈咄浚悍延媒细咔椅薹ㄔ诘ジ鱿赴谢竦米甲?。广东空间转录组研究通过对 ALS 小鼠疾病进程（症状前、发病、症状期和终末期）的脊髓组织进行空间转录组测序。

空间基因表达技术能够在保留空间背景信息的同时，多角度测量转录组谱。然而，现有的分析方法并没有解决技术分辨率有限或有效利用空间信息的问题。来自美国的科研团队开发了BayesSpace，这是一种完全贝叶斯统计方法，它使用来自空间邻域的信息来增强空间转录组数据的分辨率并进行聚类分析。基准测试证明BayesSpace在识别具有相似表达谱的空间簇和提高空间转录组学分辨率方面的效用，其既克服了有效利用空间信息进行表达数据聚类的挑战，又克服了目前空间转录组技术分辨率有限的问题。

1. 空间转录组实验步骤A。切片制备和优化：取新鲜组织、冷冻、切片，并进行HE染色成像，优化确定切片是否覆盖靶向区域。空间转录组实验步骤B。切片固定和透化：将组织切片放置在含有与RNA结合捕获探针的载玻片上，并进行固定和透化，使细胞中的 mRNA 得到释放，并结合到相应的捕获探针上，从而获取基因表达信息?？占渥甲槭笛椴街鑓。逆转和文库构建：以捕获的 RNA 为模板，进行 cDNA 合成，和测序文库制备?？占渥甲槭笛椴街鑔。高通量上机测序：对制备好的测序文库，进行二代高通量短读长测序。空间转录组实验步骤e。数据可视化分析：结合HE结果，确定哪些基因有表达，表达量高低，以及这些基因的空间位置信息。HE 染色适用于空间转录组的组织学呈现方法。

空间转录组的一般流程。将准备好的新鲜冷冻组织切片放置于空间转录组芯片上。每个细胞中的RNA分子都包含着基因表达的信息。组织切片成像，以检索组织学信息。这样就可以看到一个细胞或一组细胞在组织中的位置。空间转录组芯片上含有上千个捕获的spot，这些捕获探针的 Poly-T 尾可以结合RNA分子的 Poly-A 尾。这些阵列的排列顺序就像一个棋盘，带有相同身份条形码（barcode）的探测位于同一个正方形中。这样就可以确定每个捕获探针及其结合RNA的来源。组织切片固定。该芯片包含一个与组织切片一起成像的视觉可检测框架。研究的***主要集中于人类和小鼠的大脑，而其他***（例如肝脏）的空间转录组学研究相对滞后。江西空间转录组使用

转录本的空间位置信息可以通过在原位阵列上捕获的组织切片中的转录本来获取，?如空间转录组技术。黑龙江宣传空间转录组

1. 10x Genomics公司提供的Visium空间基因表达解决方案是目前可选的一个高通量空间转录组的商业化解决方案。该解决方案可以轻松地将空间转录组学技术应用到组织切片和染色的标准方法中，从而研究空间分辨率下整个转录组mRNA的表达情况，同时在同一组织切片中获得组织学相关信息?？占渥甲槭且幌钋把丶际?，涉及到很多细节方面的准备工作，例如组织类型的选择、前期预实验的设计、病理区域的确认等一系列内容。而且实验中存在很多不确定性因素，处理不慎容易导致整个项目失败。黑龙江宣传空间转录组

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