酵母双杂交（Y2H）：植物转录因子（Plant transcripter factors， TFs）是调控植物生长发育和环境适应性的关键分子。虽然在一些数据库中，如RiceSRTFDB （Priya and Jain， 2013）， Ricettissuetfdb （Chen et al.，PlnTFDB （Pérez-Rodríguez et al.， 2009）和PlantTFDB （Jin et al.， 2017），可以预测水稻转录因子功能。但通过具体实验研究，来直接证实转录因子对植物的调控作用仍然是必不可少的。酵母双杂交（Y2H）和酵母单杂交（Y1H）是被用于研究蛋白-蛋白以及蛋白-DNA互作的**常用技术。为了方便和促进水稻育种研究，陈凡老师与欧易生物达成合作，整合双方优势资源，历经春秋与冬夏，成功构建了基于粳稻（日本晴）基因组的水稻转录因子文库。该项成果以“一种高效的筛选系统来鉴定大米转录因子的蛋白质-蛋白质或蛋白质-DNA相互作用伙伴”为题，发表于杂志JGG上。从该技术开发以来，双杂交和三杂交报告基因数量从1个报告基因增加到了4个，降低了假阳性概率。湖北发展酵母文库做什么

酵母文库：2021年11月，山东农业大学园艺科学与工程学院张振鲁团队在MolecularPlantPathology（IF：5.663）发表了题为“Nitrate-inducibleMdBT2actsasarestrictionfactortolimitapplenecroticmosaicvirusgenomereplicationinMalusdomestica”的研究论文，报道了MdBT2蛋白在抑制病毒ApNMV基因组RNA复制中的作用。文章中所用酵母文库为欧易生物构建。ApNMV与ApMV相似，含有3种正义单链基因组RNAs：RNA1（编码1a蛋白，后面你会经常看到它，对病毒复制至关重要），RNA2（编码RNA聚合酶）和RNA3（编码MP），以及在3种RNA中排名第4的RNA4（编码CP）。当然苹果如何抵抗ApNMV的研究机制就更少了。湖北发展酵母文库做什么博士期间长期从事酵母单/双杂交文库构建及筛选的工作。

通过酵母双杂筛选实验，进一步研究AaWRKY9蛋白功能，结果筛选到了与AaWRKY9互作的AaJAZ9蛋白，并通过Y2H、BiFC、CoIP等进行了验证确认。JAZs是JA介导的植物相应中的负向调控因子，在毛状体和老叶中高表达，在芽尖和嫩叶中表达量低。为确认AaJAZ9是否抑制了AaWRKY9在促进青蒿素积累过程中的转录***功能，通过双荧光素酶报告基因检测实验发现，当AaWRKY9与AaJAZ9共表达时，其转录活性被抑制，而使用MeJA处理后，这种抑制作用被抵消，且AaWRKY9转录活性增强，反向验证实验结果一致。说明JA可以通过降解JAZ9，提高AaWRKY9转录活性，促进青蒿素生物合成。

酵母文库研究：棉花是世界上天然纤维的主要来源。近年来，气候变化给植物带来的干旱、高盐等渗透胁迫，使棉花产量稳步下降。为适应变化莫测的气候，植物不断进化出复杂而有组织的应对非生物胁迫的反应机制，其中数千个抗性相关基因间的相互作用，在提高植物的抗旱性和耐盐性中发挥着重要作用。功能基因组学研究表明，植物胚胎发育晚期丰富蛋白（LEA）就是这样一种基因，它在植物发育过程中，面对多种环境胁迫时均有表达，对提高植物的抗旱性和耐盐性具有重要作用。2022年3月，中国农业科学院棉花研究所在国际期刊上发表了BiologicalMacromolecules上发表了题为“LateembryogenesisabundantgeneLEA3（Gh_A08G0694）enhancesdroughtandsaltstresstoleranceincotton”的研究论文，该研究发现LEA3能够增强棉花的抗旱性和耐盐性。该项目中所用的棉花酵母文库由欧易生物构建。欧易生物是国内较早提供酵母杂交技术服务的生物公司，较早掌握Gateway和Smart两种建库方法。

进行了酵母双杂交文库的筛选，结果显示钙依赖的种子特异性蛋白激酶SPK可以与OsNF-YB9相互作用，分段截取互作验证显示OsNF-YB9的N端是互作所必须的（图a-b），并通过双荧光分子互补实验、BiFC、体外GST-pulldown实验得以证实（图c-e）。亚细胞定位显示SPK主要在细胞质中表达，OsNF-YB9在细胞质和细胞核中都有表达，共表达SPK和OsNF-YB9***促进了OsNF-YB9的入核（图f），表明SPK和OsNF-YB9的相互作用可能促进了OsNF-YB9从细胞质向细胞核的运输。RT-PCR显示SPK在发育中的种子中高表达，在5DAF开始***，并在10-30DAF维持高表达水平（图a-b）。spk敲除突变体种子中垩白率的增加（图c-e），但粒形和粒重与野生型没有***差别。筛选酵母文库选欧易生物技术可靠服务高效多年经验。湖北发展酵母文库做什么

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