神经科学重要的研究工具-多光子显微镜作为神经科学重要的研究工具,近年来发展快速,品牌也众多。我们通常都是在一间开着冷气的房间里的超大防震台上见过这样一套设备。台面上复杂的光路也让我们在使用中小心翼翼,生怕弄坏了哪里而无从修复。你是否想象过一台放在书桌边上就能使用的多光子显微镜,一台跟普通显微镜一样操作简便的多光子显微镜,一台不用担心会碰坏的多光子显微镜,一台可以在不同实验室之间搬来搬去的多光子显微镜,一台可以从任意角度进行观察扫描的多光子显微镜?滔博生物TOP-Bright是一家集研发,生产,销售于一体的专注于神经科学产品及致力于向高校、科研机构等领域提供实验室一体化方案的高科技企业。业务服务范围已遍布至全国各地几百家实验室。目前公司主营产品是享誉全球的国际品牌和产品,这些仪器设备都是科学研究所必备且不可替代的基础仪器双光子显微镜采用长波长激发。布鲁克多光子显微镜研究
2020年,TonmoyChakraborty等人提出了一种加快2PM轴向扫描速度的方法[2]。在光学显微镜中,物镜或样品的缓慢轴向扫描速度限制了体积成像的速度。近年来,通过使用远程聚焦技术或电可调谐透镜(ETL)已经实现了快速轴向扫描;但是,远程聚焦中反射镜的机械驱动会限制轴向扫描速度,ETL会引入球面像差和更高阶像差,从而无法进行高分辨率成像。为了克服这些局限性,该组引入了一种新颖的光学设计,能将横向扫描转换为可用于高分辨率成像的无球差的轴向扫描。该设计有两种实现方式,第一种能够执行离散的轴向扫描,另一种能够进行连续的轴向扫描。具体装置如图3a所示,由两个垂直臂组成,每个臂中都有一个4F望远镜和一个物镜。远程聚焦臂包含一个检流扫描镜(GSM)和一个空气物镜(OBJ1),另一个臂(称为照明臂)由一个水浸物镜(OBJ2)构成。将这两个臂对齐,以使GSM与两个物镜的后焦平面共轭。准直的激光束被偏振分束器反射到远程聚焦臂中,GSM对其进行扫描,进而使得OBJ1产生的激光焦点进行横向扫描。 啮齿类多光子显微镜系统利用多光子显微镜的光遗传学操作能力,我们可以对某类神经元的ji活和失活进行高精度的操作。
现代分子生物学技术的迅速发展和科技的进步,特别是随着后基因组时代的到来,人们已经能够根据需要建立各种细胞模型,为在体研究基因表达规律、分子间的相互作用、细胞的增殖、细胞信号转导、诱导分化、细胞凋亡以及新的血管生成等提供了良好的生物学条件。然而,尽管人们利用现有的分子生物学方法,已经对基因表达和蛋白质之间的相互作用进行了深入、细致的研究,但仍然不能实现对蛋白质和基因活动的实时、动态监测。在细胞的生理过程中,基因、尤其是蛋白质的表达、修饰和相万作用往往发生可逆的、动态的变化。目前的分子生物学方法还不能捕获到蛋白质和基因的这些变化,但获取这些信息对与研究基因的表达和蛋白质之间的相互作用又至关重要。因此,发展能用于、动态、实时、连续监测蛋白质和基因活动的方法是非常必要的。
对于双光子(2P)成像,散焦和近表面荧光激发是两个相对较大的深度限制因素,而对于三光子(3P)成像,这两个问题**减少。 然而,由于荧光团的吸收截面远小于2P,三光子成像需要更高的脉冲能量才能获得与2P相同激发强度的荧光信号。 功能性3P显微镜比结构性3P显微镜要求更高,后者需要更快的扫描速度以便及时采样神经元活动。 为了在每个像素的停留时间内收集足够的信号,需要更高的脉冲能量。 复杂的行为通常涉及大规模的大脑神经网络,这些网络既有本地连接,也有远程连接。 为了将神经元的活动与行为联系起来,需要同时监测* * *分布的超大型神经元的活动。 大脑中的神经网络将在几十毫秒内处理输入的刺激。 为了理解这种快速神经元动力学,MPM需要快速成像神经元的能力。 快速MPM方法可分为单束扫描技术和多束扫描技术。 全球多光子显微镜主要生产地区分析,包括产量、产值份额等。
因斯蔻浦(上海)生物科技有限公司 双光子显微镜的基本原理是:在高光子密度的情况下,荧光分子可以同时吸收 2 个长波长的光子,在经过一个很短的所谓激发态寿命的时间后,发射出一个波长较短的光子;其效果和使用一个波长为长波长一半的光子去激发荧光分子是相同的。双光子激发需要很高的光子密度,为了不损伤细胞,双光子显微镜使用高能量锁模脉冲激光器。这种激光器发出的激光具有很高的峰值能量和很低的平均能量,其脉冲宽度只有 100 飞秒,而其周期可以达到 80至100兆赫兹。在使用高数值孔径的物镜将脉冲激光的光子聚焦时,物镜的焦点处的光子密度是比较高的,双光子激发只发生在物镜的焦点上,所以双光子显微镜不需要共聚焦***,提高了荧光检测效率。多光子显微镜作为一种研究微观结构和功能的技术,在众多领域得到了普遍的应用。啮齿类多光子显微镜代理
多光子显微镜的分辨率比传统的单光子共聚焦要低的多。布鲁克多光子显微镜研究
快速光栅扫描有多种实现方式,使用振镜进行快速2D扫描,将振镜和可调电动透镜结合在一起进行快速3D扫描,但可调电动透镜由于机械惯性的限制在轴向无法快速进行焦点切换,影响成像速度,现可使用空间光调制器(SLM)代替。远程聚焦也是一种实现3D成像的手段,如图2所示。在LSU模块中,扫描振镜进行横向扫描,ASU??榘ㄎ锞礚1和反射镜M,通过调控M的位置实现轴向扫描。该技术不仅可以校正主物镜L2引入的光学像差,还可以进行快速的轴向扫描。想要获得更多神经元成像,可以通过调整显微镜的物镜设计来扩大FOV,但是具有大NA和大FOV的物镜通常重量较大,无法快速移动以进行快速轴向扫描,因此大型FOV系统需要依赖于远程聚焦、SLM和可调电动透镜。布鲁克多光子显微镜研究
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