摘要: 本发明提供了一种磁性微球分离纯化纳豆激酶的方法。将表面偶联有亲和配基的磁性微球加入到纳豆激酶的发酵液中，在室温下缓慢搅拌充分混合，使纳豆激酶特异性地吸附在磁性微球表面；采用磁铁将吸附有纳豆激酶的磁性微球从发酵液中分离出来，用缓冲溶液清洗一次去除杂质，再用解析液进行解析，收集到纳豆激酶的洗脱液；***经过冷冻干燥得到纳豆激酶产品。分离后纳豆激酶的活力为８５％，纯化因子为６．０。本发明具有周期短、操作简单、生产成本低且易于规模化生产等优点。 利要求: 一种磁性微球分离纯化纳豆激酶的方法，其特征在于，所述的纳豆激酶分离纯化方法包括以下几个步骤：（１）纳豆激酶发酵液的制备从固体培养基上挑取纳豆激酶的单菌落接入２０－１００ｍＬ的种子培养基中，摇床中培养１２－２４ｈ，按２％－６％ 接种量接入发酵液体培养基中，在２５－３７℃下发酵罐培养２４－４８ｈ，液体发酵结束后，通过离心除去菌体，得到纳豆激酶发酵液；（２）亲和配基在磁性微球上的固定化将自制的磁性高分子微球进行表面功能化修饰得到表面含有环氧功能基团的磁 性微球，在５０－８０℃条件下，以氢氧化钠为催化剂，进行亲和配基的固定化反应，获得表面含有亲和南京分离纯化微球哪家强

磁性高分子微球的制备
目前制备磁性高分子纳米微球的方法主要分为五类，其主要包括：包埋法、原位法、单体聚合法、界面沉积法及自组装法。
2.1包埋法
包埋法是将聚合物溶解在含有磁性超微粒子的溶液中，然后加入大量的沉淀剂，通过交联、絮凝、雾化、沉积、蒸发等手段使高分子物质沉析在磁性粒子表面形成具有核壳结构的复合微球。高分子物质与磁性粒子主要通过范德华力、氢键、螯合作用或共价键等作用力结合。Li等通过化学共沉淀法合成纳米粒子Fe3O4磁核，以壳聚糖为包裹材料包被自制的磁核，采用乳化交联法制备了具有核-壳结构的磁性高分子微球-壳聚糖磁性微球，并偶联肝素配基得到了一种新型亲和磁性微球。所得亲和磁性微球具有较窄的粒径分布、形状规整，粒径在50nm左右。将磁分离技术应用于凝血酶的分离纯化，得到了较好的效果（酶比活达1879.71U/mg，得率85%，纯化倍数11.057，为传统柱层析法的两倍）。Chi?riuc等将含Fe2+和Fe3+溶液逐滴加入壳聚糖的NaOH溶液中制的可用于负载头孢霉素的磁性壳聚糖微球。
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常用的纯化方法冷冻结晶法 　　冷冻结晶法是在低温的条件下，依据混合脂肪酸各组分的凝固点差异进行纯化，进而达到纯化多不饱和脂肪酸的目的。将混合脂肪酸溶解在**或乙醇中，置于低温下，在溶液中短链脂肪酸较长链脂肪酸的溶解度低，饱和脂肪酸较不饱和脂肪酸的溶解度低，这种溶解度差异随温度降低表现更为。 　　冷冻结晶法工艺原理简单，操作方便，有效成分不易发生变性反应。但其操作过程中温度要求苛刻，需要回收大量的有机溶剂，纯化效率不高，这限制了大规模的生产，但可以用于生产低成本的保健品类，从而满足中低层消费者的需求。

磁性高分子微球是近年发展起来的一种新型磁性材料，是通过适当方法将磁性无机粒子与有机高分子结合形成的具有一定磁性及特殊结构的复合微球。磁性复合微球不仅具有普通高分子微球的众多特性还具有磁响应性，所以不仅能够通过共聚及表面改性等方法赋予其表面功能基 (如－OH、－COOH、－CHO、－NH2,等)，还能在外加磁场作用下具有导向功能。 结合方式 ①与高分子先结合成微球，磁粉再吸附其表面； ②磁粉和高分子先结合成微球再吸附； ③磁粉、、高分子一起混合经均匀化后再微球化． Devineni等人合成 magnetic microsphers methotrexate (MM-MTX) 载体用以**，MTA通过2—二甲胺甲基—1—乙基链接在磁性粒子的表面，通过水解可以释放．但是实验发现在45min内又重新分配，导致小鼠的死亡．此类问题有待进一步研究解决．

在酶催化领域：微球作为酶固定的载体可以保持酶的高度专一性和催化效率；提高酶的稳 定性和寿命；减小酶对产品的污染；实现生产连续化和酶的循环使用。微球也可以用于催 化剂的载体使得催化剂易于回收使用。 在化工领域：微球已***地添加到油漆、涂料、造纸、塑料以改善产品的抗刮性，提高产 品的耐磨性，及光学性能。 总之纳米微球材料应用非常***，几乎渗透到所有的领域，纳米材料科学家不断地开发出 新技术来赋予纳米微球新的光,电,磁,等各种功能, 使它为人类创造无限可能，以满足现代产 业关键材料和技术的需求。 上海分离纯化微球制造厂家

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如何制作纳米微球呢？
离子交联法是制作纳米微球的基本方法之一，适用于以壳聚糖、海藻酸钠等
为材料的纳米微球。其主要原理是作为***载体的材料通过离子交联法从乳
液中析出，同时通过氢键相互作用和疏水相互作用将***包埋在载体中，从
而制备成载药微球。该方法制备条件温和，整个过程不使用对人体有害的试
剂，也成为载药微球的理想制备方法之一。
纳米微球的典型制备方法还有“乳化-溶剂挥发法”和“微流控法”。“乳
化-溶剂挥发法”是将模型***先溶解于有机溶剂中,然后滴加到含有表面活
性剂的水相中,在均质机的高速剪切下形成油相/水相型乳液,再通过常压或减
压方式除去乳液分散相中的挥发性有机溶剂,使纳米粒硬化,***通过冷冻干
燥从水性混悬液中收集纳米粒。“微流控法”是一种在微米尺度的通道中操
控两种或几种互不相溶的微小体积液体,连续、可控地生产具有高度单分散尺
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