相比于qPCR，dPCR在转基因检测中具有以下优势：（1）检测灵敏度高：理论上dPCR的灵敏度可达1个拷贝，而实际应用中dPCR的小检出限和比较低定量限数值非常接近，所以dPCR可以在非常低的目标拷贝数下得到精确的结果；通常转基因比参考基因（内源基因）浓度低很多；（2）前处理简单且受基质成分干扰较小：dPCR反应效率和精密度受到食品基质成分干扰影响较小，可应用于混合基质样品中低丰度DNA的检测；（3）dPCR对抑制剂的敏感性较低：由于dPCR结果表示为“有荧光“或“无荧光”，即使存在抑制剂降低了荧光强度仍可以表示为“有荧光；（4）适合多重转基因检测：食品或饲料提取的DNA中可能包含多种转基因片段，可以进行多重dPCR检测，提高分析效率。同时，dPCR可以直接溯源至SI国际单位制摩尔，适合单一、双重及多重转基因标准物质研究，一次可识别不同的转基因区域。下面详细进行说明。dPCR在转基因检测方面的应用仍处于研究和探索的阶段。深圳医疗系统认证数字PCR

dPCR在使用过程中需要特别注意体积误差造成的结果偏差。体积误差对于测量拷贝数浓度会产生偏差。目前dPCR中体积优化方法以光学显微镜观测为主。分散体积的差异会增加拷贝数结果的不确定性，Emslie等使用光学显微镜纵向拍照比较图片边缘的微小差异，考察了数字PCR系统中每个微孔内和孔与孔间的体积差异对实验结果的影响程度。Corbisier等使用微滴数字PCR对6种不同质量分数棉籽粉质粒DNA标准物质[ERM-AD623a-f，浓度范围（10~10）copies/ul]进行分析，优化了液滴体积得到相应校正因子，并使用该校正因子发现并校准了运行软件中液滴体积不变的假设而引起的数据偏离，数据结果的一致性有明显提高。苏州一体化数字PCR油滴制造数字PCR适用于依靠Ct值不能很好分辨的应用领域。

根据泊松分布的定义和适用条件可知，如果我们设微液滴总数为N，投入的靶序列拷贝数为M，那么“每个微液滴中的靶序列拷贝数”的概率分布是近似满足泊松分布的。理解之前，首先要明确一点，在检测的过程中，并不是说一个样本中检测到了几个亮点，这个反应当中就有几个目标基因的拷贝。因为目标基因的片段，在微滴当中的分布，是符合泊松分布的（也就是说进不进的概率相等，并且相互独立）。所以，一个发光的微滴中，可能有一个或者三个四个，甚至更多个目标基因的拷贝。因此，发光的微滴数与原始的基因拷贝数并不是一对一的对应关系。

数字PCR实验步骤包括：1）试剂配制：将10xdPCRBuffer、dPCR酶、引物和探针、无核酸酶水混合成dPCR预混液，并分装到8联排管中或96孔板中；将各待测样本的核酸模板、阳性对照、阴性对照分别加入相应的8联排管中或96孔板中；2）芯片进样：在小海龟BioDigital·青全自动样品处理系统上进行芯片上反应液进样和液滴生成；3）芯片扩增：在小海龟BioDigital·青PCR扩增仪上进行芯片上PCR扩增反应；4）芯片阅读：在小海龟BioDigital·青生物芯片阅读仪上进行芯片上荧光信号阅读；5）数据分析：使用生物芯片数据分析·青软件进行数据分析和报告导出；3D数字PCR是基于纳米流体芯片进行检测，通过一次检测，将样品分到数千个单独的PCR。

目前dPCR主要有两种形式，芯片式和液滴式，但基本原理都是将大量稀释后的核酸溶液分散至芯片的微反应器或微滴中，每个反应器的核酸模板数少于或者等于1个。这样经过PCR循环之后，有一个核酸分子模板的反应器就会给出荧光信号，没有模板的反应器就没有荧光信号。根据相对比例和反应器的体积，就可以推算出原始溶液的核酸浓度。可以使用几种不同的方法来分配样品，包括微孔板，毛细管，油乳剂和带有核酸结合表面的小型化腔室阵列。样品的分配使人们可以通过假设分子种群遵循泊松分布来估计不同分子的数量，根据泊松分布的原理，反应体系中目标分子的拷贝数可以通过公式A=-ln[(N-X)/N]*N计算，从而解决了多个目标分子存在于单个液滴中的可能性。目前dPCR中体积优化方法以光学显微镜观测为主。华南地区全自动多重数字PCR分析应用

相较于qPCR，数字PCR可让你能够直接数出DNA分子的个数，是对起始样品的定量。深圳医疗系统认证数字PCR

3D数字PCR为液体活检提供技术支持液体活检是一种非侵入性的检测基因及临床效果的一种方法，目前可能正在开展有关3D数字PCR在在液体活检中的疗效，为后期临床提供更多可靠的指导作用。报道称“无创伤性肺检测技术即将登陆中国”。随着基因检测技术，如类似3D数字PCR技术的发展，推动我们将进入了“DNA的应用商城”这样的新时代，如23andme、华大基因等专业的检测服务机构，提供更加专业的基因检测结果，经基因报告解读师或遗传咨询师进行通俗的解读，让我们每一个人都能够了解自己的基因，拥有自己的“生命之书”，让我们更加健康的生活。精细医疗其实本质是应用生物学信息与大数据科学的交叉发展的新型医学概念与医疗模式。对于精细医疗，重点在于“精细”，不仅只是简单的基因测序如此简单，更需要精细的诊断与精细的。深圳医疗系统认证数字PCR

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