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深圳全自动多重数字PCR仪器

来源: 发布时间:2023-02-05

数字聚合酶链式反应(digitalpolymerchainreaction,dPCR)技术因具有高灵敏度、受基质干扰少等优势而被广用于转基因食品检测。本研究综述了数字PCR技术的原理、系统各部件的优劣势,梳理了数字PCR技术在转基因检测与溯源技术(标准物质)方面的进展和发展趋势,以期为转基因食品检测领域提供参考依据。dPCR的扩增过程大致上可以分为3步:样品的分散、样品的热循环扩增和样品的检测。对于数字PCR仪器系统,各个部件之间仍然有较大的改进空间,要发挥部件之间的协同作用是很重要的,而且有持续研究的价值。表1中总结了部分常见的数字PCR系统的类型,以及相对在硬件、便携性、性价比和自动化程度上的比较。20世纪末,Bert Vogelstein等提出数字PCR的概念。深圳全自动多重数字PCR仪器

数字PCR是一种核酸分子定量技术。当前核酸分子的定量有三种方法,光度法基于核酸分子的吸光度来定量;实时荧光定量PCR(RealTimePCR)基于Ct值,Ct值就是指可以检测到荧光值对应的循环数;数字PCR是的定量技术,基于单分子PCR方法来进行计数的核酸定量,是一种定量的方法。主要采用当前分析化学热门研究领域的微流控或微滴化方法,将大量稀释后的核酸溶液分散至芯片的微反应器或微滴中,每个反应器的核酸模板数少于或者等于1个。这样经过PCR循环之后,有一个核酸分子模板的反应器就会给出荧光信号,没有模板的反应器就没有荧光信号。根据相对比例和反应器的体积,就可以推算出原始溶液的核酸浓度。深圳全自动数字PCR生命科学用品使用数字PCR技术对436例非小细胞肺*样品进行检测,并挑选样本验证一致性。

根据泊松分布的定义和适用条件可知,如果我们设微液滴总数为N,投入的靶序列拷贝数为M,那么“每个微液滴中的靶序列拷贝数”的概率分布是近似满足泊松分布的。理解之前,首先要明确一点,在检测的过程中,并不是说一个样本中检测到了几个亮点,这个反应当中就有几个目标基因的拷贝。因为目标基因的片段,在微滴当中的分布,是符合泊松分布的(也就是说进不进的概率相等,并且相互独立)。所以,一个发光的微滴中,可能有一个或者三个四个,甚至更多个目标基因的拷贝。因此,发光的微滴数与原始的基因拷贝数并不是一对一的对应关系。

dPCR的结果统计方式有2种,一种是采用标记多种颜色,通过不同检测通道分辨不同颜色和强度,再根据分散液滴的数量计算待测基因的含量;另一种采用概率统计的数据处理方法,即通过泊松分布的方法对结果进行分析。应用概率统计分析数据和对数据处理方法的模型直接关系着结果的准确性和分析时间的长短。常用的统计方法是假设每个微反应单元的体积相同,根据泊松统计计算拷贝数,公式为:M=-Vx1n(1-x/)其中M是目标总拷贝数量;V是微反应单元数量;x是发光的微反应单元数量。杨雁峰博士坚信数字PCR是可以应用于无创产前筛查的理想技术之一,这也是他2016年创立塔歌生物的初衷。

基于数字PCR技术平台,塔歌生物成功地开发了胎儿染色体非整倍体(T21,T18和T13)无创产前筛查试剂盒(数字PCR-NIPT),并已完成数百例临床样本验证。数字PCR-NIPT的阳性检出率和NGS相似,且成本接近血清学,可以在上述应急策略中取代血清学作为灵敏度和特异性更高的初筛方法,以有效提高阳性检出率,降低需要复筛的假阳性样本数和节省总的筛查成本。数字PCR应用前景广阔,可用于病原微生物检测、基因检测、无创产前筛查、测序结果验证等领域。但目前,大多数医院采购的数字PCR仪器是用于科研层面,在临床应用上仍处于起步阶段,未得到普遍应用。dPCR被称作第三代PCR技术,但dPCR技术的广泛应用逐渐显现出一些不足之处。上海赛默飞数字PCR分析应用

dPCR在转基因检测方面的应用仍处于研究和探索的阶段。深圳全自动多重数字PCR仪器

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