外泌体提取:1、过滤。超滤膜也可用于分离外泌体。根据外泌体的大小,从蛋白质和其他大分子中分离外泌体。较常见的过滤膜具有0.8μm、0.45μm或0.22μm的孔径,可用于收集大于800nm、400nm或200nm的外泌体,也有设计成微柱多孔硅纤毛结构以分离40-100nm外泌体:不过,该方法由于过滤膜的粘附,可能会损失外泌体,并且过滤时的压力和剪切力,可能会使外泌体变形受损。2、基于聚合物的沉淀技术。基于聚合物的沉淀技术通常包括将样本与含聚合物的沉淀溶液混合,在4℃温育并低速离心。用于聚合物沉淀的较常见聚合物之一是聚乙二醇(PEG)。用这种聚合物沉淀具有许多优点,包括对分离的外泌体影响小、pH中性等。目前大多数快速分离外泌体的商品化试剂盒都是基于此方法。然而基于聚合物的沉淀方法可能会同时分离非囊泡污染物(包括脂蛋白)而且,聚合物材料的混杂可能会影响下游分析。外泌体提取:可分离到大小相近的囊泡颗粒。广州正规外泌体提取试剂直销厂家
外泌体研究的主要应用:外泌体的功能取决于其所来源的细胞类型,其可参与到机体免疫应答、抗原提呈、细胞迁移、细胞分化、一些病症侵袭等方方面面。有研究表明一些病症来源的外泌体参与到一些病症细胞与基底细胞的遗传信息的交换,从而导致大量新生血管的生成,促进了一些病症的生长与侵袭。一些病症。一些病症转移。来自白血病干细胞的外泌体促进急性骨髓性白血病(AML)细胞的增殖、迁移和压制细胞凋亡。治病靶标。利用外泌体递送小干扰RNA来沉默KRASG12D,从而特异性高效靶向至胰腺病细胞,以明显降低RAS活化、病细胞增殖和转移过程。免疫。β细胞将含有蛋白质和miRNA的外泌体释放到细胞外,并可转移到其他代谢部位或免疫内皮细胞,有利于维持葡萄糖体内平衡或造成胰岛素抵抗。心血管。外泌体介导miR-155从平滑肌细胞转移到内皮细胞导致了内皮细胞的损伤促进动脉硬化。分子标记。疾病诊断。在酒精性肝病、NASH、菌类性肝炎、药物性肝损伤和肝细胞病中发现循环EVs的水平上升长沙正规外泌体提取试剂直销厂家外泌体提取色谱法是利用根据凝胶孔隙的孔径大小与样品分子尺寸的相对关系而对溶质进行分离的分析的方法。
外泌体(Exosomes)是细胞分泌到胞外的一种囊泡(ExtracellularVesicles,EVs),其大小为30-150nm,具有双层膜结构和茶托状形态,含有丰富的内含物(包括核酸、蛋白和脂质等),参与细胞间的分子传递。外泌体普遍存在于细胞培养上清以及各种体液中,包括血液、唾液、尿液、乳汁等,同时也存在于组织样本中,如脑组织、肌肉组织、脂肪组织等。脑组织分离方法简述:将脑组织剪成薄片,放入离心管中加上消化液进行消化,经水浴、反复轻轻上下颠倒,再用移液间断缓慢吹吸至消化结束。随后加入培养基于消化液中,混匀,置于冰上。再进行一系列的差速超速离心过程,包括除杂、滤膜过滤、超离等。较后用PBS重悬外泌体,用重悬后的外泌体进行下面的透射电镜(TEM)、纳米粒径追踪分子(NTA)和markerWB鉴定。来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体,经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。
外泌体提纯试剂盒的特色与优势:纯化和富集的完整血浆/血清,尿液和细胞培养基中外泌体的可用于功能研究;样本输入量多样;无需耗时的超速离心,过滤或特殊注射器;无需沉淀试剂,也无需过夜培养;无需蛋白酶处理;适用于多种物种;外泌体被纯化并且不含任何其他RNA结合蛋白;可以使用NanoSight?或电子显微镜分析纯化的外泌体,以评估近似外泌体大小范围和浓度。外泌体(exosomes)是一种能被机体内大多数细胞分泌的直径大约为30~150nm的具有脂质双层膜的微小膜泡。它普遍存在并分布于各种体液中,携带和传递重要的信号分子,形成了一种全新的细胞间信息传递系统,影响细胞的生理状态并与多种疾病的发生与进程密切相关。外泌体的提取分离:PEG-base沉淀法。
外泌体是指包含了复杂RNA和蛋白质的小膜泡(30-150nm),现今,其特指直径在40-100nm的盘状囊泡。1983年,外泌体初次于绵羊网织红细胞中被发现,1987年Johnstone将其命名为“exosome”。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体,经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。所有培养的细胞类型均可分泌外泌体,且外泌体天然存在于体液中,包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。有关他们分泌和摄取及其组成、“运载物”和相应功能的精确分子机制刚刚开始研究。外泌体目前被视为特异性分泌的膜泡,参与细胞间通讯,对外泌体的研究兴趣日益增长,无论是研究其功能还是了解如何将其用于微创诊断的开发。外泌体提取:具有高粘度的生物样品。珠海正规外泌体提取试剂厂家
外泌体的提取方法:密度梯度离心。广州正规外泌体提取试剂直销厂家
外泌体的生物学功能研究中需要分离完整的外泌体颗粒,而传统超速离心方法步骤繁琐、硬件要求高、操作难度大。李记生物自主开发的外泌体快速提取试剂盒,组分经过优化处理,适用于细胞培养上清液、血清、血浆、尿液及其他体液(脑脊液、腹水、羊水、乳汁以及唾液等)中的外泌体提取,并搭配纯化过滤装置,可快速高效地获得高纯度外泌体颗粒。注意事项:1.对于待测样品粘度过大时,可将样本用4℃预冷的1×PBS缓冲液进行等体积稀释处理。2.当血清、血浆、唾液等样品收获的外泌体浓度较高,收获的外泌体颗粒无法通过EPF柱纯化时,可用4℃预冷的1×PBS进行稀释后再通过EPF柱离心。广州正规外泌体提取试剂直销厂家