为了能够从小鼠身上提取足够的DNA,要从它们身上取下足量的细胞用于实验。为了尽可能减少对动物的伤害和方便试验人员的操作,剪下一小段鼠尾是一个不错的选择。就让我们来盘点一下「耗子尾汁」的三种用法↓↓↓鼠尾取血剪下几毫米小鼠尾巴、在小鼠尾静脉上划一道小口、用注射器抽取的操作都可以得到这种鲜红的「耗子尾汁」。它可以用于监测小鼠血液成分的变化,确认小鼠是否患上了糖尿病或者某些能够改变小鼠的血糖等。比起心脏和眼部取血,实验用鼠尾尖取血的取血量较小,但取血之后,小鼠还能继续下一步建模或者实验,完全没有性命之忧。鼠尾胶原,是一种细胞支持物,它是细胞外基质的主要成份。广州鼠尾胶原平均价格
鼠尾胶原:含细胞三维胶原凝胶的制备(以配制1mg/mL三维胶1mL为例)准备好悬浮于培养液的细胞,并放置于冰浴中。将200μL本品加到12μL0.1mol/LNaOH中(如果反过来把12μL0.1mol/LNaOH加到胶原溶液中,会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结),立即混匀。再加入23μL10×PBS或10×培养液,混匀后立即加到培养器皿中(混匀后pH为7左右,如果PBS或培养液中没有加酚红,初次使用时需要测定pH值)。加入760μL的细胞悬浮液,混匀后立即加到培养器皿中。将培养器皿在室温放置20min待胶凝固后,加入适当体积的细胞培养液,转移到培养箱中培养。本品在室温下pH中性时可迅速成胶,在操作过程中要尽量保持低温。保存条件4℃保存,切勿冻存,有效期一年。广州正规鼠尾胶原直销厂家在冰水浴中将粉碎的鼠尾腱在醋酸溶液中溶胀。
鼠尾胶原蛋白I型,用那一种胶原酶可以溶解:1.将胶原加入到0.1M的醋酸中,制备成浓度为0.1%的溶液。在室温中搅拌1-3小时直到完全溶解。2.建议将溶液转移到拧口的玻璃瓶中,并小心的在瓶底铺上一层氯仿。氯仿的量约为胶原溶液的10%。不要晃动或搅拌。在2-8度中放置过夜。在无菌条件下转移上层的胶原溶液。我们不建议用过滤的方法无菌化。已经发现该方法会导致丢失蛋白。3.稀释一定数量的胶原溶液。4.按照6-10ug/cm2的浓度包被培养瓶。在室温或37度结合数小时或者2-8度过夜。5.从包被表面除去多余的液体。过夜干燥。如果胶原溶液不是无菌的,这时候可以在无菌细胞操作室中暴光在紫外线下过夜消毒。在接种细胞前用无菌的水漂洗。论鼠尾胶原能促进毛细胞贴壁,涂布鼠尾胶原有利于膜片钳实验的长时程记录,并且制作简便,成本低廉。
细胞培养过程中,细胞需要贴附在培养皿表面(悬浮培养细胞除外)才能完成生长过程,而有一些细胞却总是不太给力,自己完成不了贴壁过程或者贴壁困难,这个时候鼠尾胶原蛋白就能承担起让细胞更容易贴壁的作用。这一步也被称作涂层(coating),给培养皿涂上了一层胶原蛋白后,细胞就能更好地贴附上去,除了培养皿,一些需要使用海藻碳酸钙微球培养得细胞,同样也可以用鼠尾胶原蛋白协助细胞贴壁生长。耗子尾汁还能变得更加,一种被称作鼠尾胶原蛋白的“珍贵”液体就来自大鼠的尾巴,制作过程需要经历醋酸抽提鼠尾胶原醋酸溶解:将鼠尾胶原加入到0.1M的醋酸中。
鼠尾胶原实验应用:鼠尾胶原在原代培养耳蜗血管纹边缘细胞中的应用。目的:建立利用自制的鼠尾胶原培养大鼠耳蜗边缘细胞的方法。方法:制作鼠尾胶原,并观察利用自制的鼠尾胶原所培养出大鼠耳蜗边缘细胞的效果。结果:自制的鼠尾胶原能正常地培养出大鼠耳蜗边缘细胞,细胞角蛋白18表达阳性,免疫组织化学结果和扫描电镜证实所培养的细胞具有典型的分泌上皮细胞特征。结论:成功建立了利用自制鼠尾胶原培养大鼠耳蜗边缘细胞的方法,并且制作简便,成本低廉。在操作过程中要尽量保持低温。保存条件4℃保存,切勿冻存,有效期一年。开封正规鼠尾胶原哪家好
加入适当体积的细胞培养液,转移到培养箱中培养。广州鼠尾胶原平均价格
胶原蛋白的提取方法:1.碱法提取:碱法提取胶原蛋白常用的处理剂为石灰、氢氧化钠、碳酸钠等。如Holzer等[5]采用1%~1.5%石灰水浸泡的方法提取胶原蛋白。由于它容易造成肽键水解,因此得到的水解产物分子量比较低。所以,若想保留胶原的三股螺旋结构,此法不可取。2.盐法提取:盐法提取胶原蛋白所用的中性盐有盐酸-三羟甲基胺基甲烷(Tris-HCl)、氯化钠、柠檬酸盐等。在中性条件下,当盐的浓度达到一定量时,胶原溶解。并且可采用不同浓度的氯化钠对提取的胶原蛋白进行盐析处理,可以沉淀出不同类型的胶原蛋白。广州鼠尾胶原平均价格