基因实验室与PCR实验室的规划布局要求:1、环境要求通风、温度和湿度实验室的长期使用,有毒、有害等污浊气体不及时排出会危害室内操作人员健康。实验室良好的通风环境是必要前提。除了实验室建筑选址的朝向和所处地域的气候特征,实验室通风系统也是必须考虑的问题。通风柜作为保持实验室内安全、卫生的重要柜体,是建立一个科学实验室必不可少的组成部分。洁净度实验室的洁净,除了实验室地面、实验室器具的清洁,还要考虑实验室内空气的洁净度。不良的空气质量会影响实验的正常进行,扩散到空气中的有害物质也会危害到人体健康。2、设施要求给排水、排污系统标准规范的实验室,都会配置有供水、排水和排污系统,实验台配置水池、滴水架、排水槽,通风柜与通风柜管道联通。3、实验室工作人员要求PCR实验室内工作人员必须参加由国家卫生部或各省临床检验中心举办的临床基因扩增培训班,并持证上岗。PCR实验室通过验收,实验室至少必须应有两个以上持有“临床基因检测上岗证”。PCR实验室必须建立严格的实验室管理制度、建立标准化操作程序(SOP)、建立系列质量管理文件等,确保实验室日常运行符合国家卫生部的要求,确保检测结果准确、确保实验室卫生安全。PCR仪是利用DNA聚合酶进行专一性的连锁复制。国产高校科研PCR仪批发厂家
1.一般性原则(1)长度:一般引物互补区的长度为16-25bp,引物互补区的4×(G十C)十2×(A十T)不要没有必要大于70,一般也不要低于50(2)G十c含量:好在45%一55%之间,但有时受模板限制,无法理想化。但在有几种选择时,可以把G十c含量接近50%作为参数之一(3)碱基分布的随机性:应避免连续出现4个以上的单一碱基。尤其是不应在其3’端出现超过3个的连续G或C,否则会使引物在G十C富集序列区错误引发。(4)引物自身:不能含有很长的牢固的自身互补序列,尤其是引物3‘端回折形成的发夹不要一般超过3碱基,否则会影响引物与模板的结合(5)引物之间:两个引物之间不应有很长的牢固的互补或同源碱基,尤应避免3’端的互补重叠。2.具体原则①引物长度;特异性一般通过引物长度和退火温度控制。如果PCR的退火温度设置在近于引物Tm值(引物/模板双链体的解链温度)几度的范围内,18到24个碱基的寡核苷酸链是有很好的序列特异性的。引物越长,扩增退火时被引发的模板越少。为优化PCR反应,使用确保溶解温度不低于54℃的短的引物,可获得好的效率和特异性。总的来说,好在特异性允许的范围内寻求安全性。每增加一个核苷酸,引物特异性提高4倍;这样,大多数应用的短引物长度为18个核苷酸。 上海实时荧光PCR仪销售价格PCR的三个反应(变性-退火-延伸)0步骤反复进行,使DNA扩增量呈指数上升。
引物设计时使合成的寡核苷酸链(18~24聚物)适用于多种实验条件仍不失为明智之举。②引物的二级结构包括引物自身二聚体、发卡结构、引物间二聚体等。这些因素会影响引物和模板的结合从而影响引物效率。对于引物的3’末端形成的二聚体,应控制其ΔG大于,因为此种情形的引物二聚体有进一步形成更稳定结构的可能性,引物中间或5’端的要求可适当放宽。引物自身形成的发卡结构,也以3’端或近3’端对引物-模板结合影响更大;影响发卡结构的稳定性的因素除了碱基互补配对的键能之外,与茎环结构形式亦有很大的关系。应尽量避免3’末端有发卡结构的引物。③引物GC含量和Tm值PCR引物应该保持合理的GC含量。含有50%的G+C的20个碱基的寡核苷酸链的Tm值大概在56~62℃范围内,这可为有效退火提供足够热度。一对引物的GC含量和Tm值应该协调。协调性差的引物对的效率和特异性都较差,因为降低了Tm值导致特异性的丧失。这种情况下引物Tm值越高,其错误引发的机率也越大。若采用太高的退火温度,Tm值低的引物对可能完全不发挥作用。在从一批在特定序列范围内已合成好的寡核苷酸中选择一对新的引物时,这种GC含量和Tm值的协调非常关键。一般来说。
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