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来源: 发布时间:2021-12-05

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    目前,采用荧光定量PCR检测技术可以对淋球菌、沙眼衣原体、解脲支原体、人类瘤病毒、单纯疱疹病毒、人类免疫缺陷病毒、肝炎病毒、流感病毒、结核分枝杆菌、EB病毒和巨细胞病毒等病原体进行定量测定。与传统的检测方法相比具有灵敏度高、取样少、快速简便等优点。如:结核菌基因诊断的意义主要表现在:a.区分TB与其它分枝杆菌;b.检测TB耐药基因;c.提高TB的阳性检出率。⑵产前诊断到目前为止,人们对遗传性物质改变引起的遗传性疾病还无法,只能通过产前监测,减少病婴出生,以防止各类遗传性疾病的发生,如为减少X连锁遗传病患儿的出生,从孕妇的外周血中分离胎儿DNA,用实时荧光定量PCR检测其Y性别决定区基因是一种无创伤性的方法,易为孕妇所接受。⑶药物疗效考核对乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)定量分析显示:病毒量与某些药物的疗效关系。HCV高水平表达,干扰素作用不敏感,而HCV低滴度,干扰素作用敏感;在拉米夫定过程中,HBV-DNA的血清含量曾有下降,随后若再度上升或超出以前水平,则提示病毒发生变异。如PCR技术在HBV检测中的应用及意义:a.了解乙肝病毒在体内存在的数量。b.是否复制。c.是否传染,传染性有多强。d.是否有必要服药。 国产梯度PCR仪批发价PCR仪也叫基因扩增仪。

    PCR基因扩增法在遗传性疾病产前诊断中的应用,遗传病是由于遗传物变化而引起的机体某一功能或缺陷或异常所致的疾病,其根本变化在于遗传物质。苯西酮尿症(PKU)是一种常染色体隐性遗传病,患者因苯丙酸羟化酶转化为酷氨酸,使苯氨酸及其代谢物在体内大量蓄积,出现脑组损伤及不可逆性智力发育障碍。PKU患者出生时正常,新生儿一经确诊为PKU停止母乳喂养采用低苯丙氨酸钦食疗法8—10年,可使患者智力水平发展维持正常。由于低苯丙氨酸钦食非常昂贵,一般家庭难以承受,因此,施行产前诊断,防止患儿出生是比较好的选择。PAH只在肝细胞中表达,不能用血细胞,成纤维细胞、羊水、绒毛细胞进行酶活性分析,只能进行基因诊断。PKU的基因变化并非全部PAH基因的缺失,而是以点突变为主要表现形式,而且其突变位点很多。必须使用PCR扩增结合,ASO,SSCP或使用扩增片段长度多态性分析(AmpFLA)进行检测,这些技术都较复杂,检验人员须经专业培训。

    选择该物种使用频率高的密码子,以降低引物的简并性。③应努力避免3’末端的简并,对于大多数氨基酸残基来说,意味着引物3’末端不要位于密码子的第三位。④在一些多义位置使用脱氧次黄嘌呤(dI)代替简并碱基。4.测序引物设计当然,测序引物的设计一般都由测序公司来完成,如果需要自己设计的话;那么除了按照上面所提到的引物设计通用标准外,还需要注意两点:①测序引物的特异性的标准掌握应该更严格一些,也就是说设计时更优先考虑特异性。因为在测序反应中,如果引物与模板在非预期位置退火并引发链延伸,会对结果对来很大的干扰甚至造成结果无法识读。②测序引物的Tm值适当高一些。现在大部分测序反应均选用耐热的测序级DNA聚合酶来催化,并采用PCR的热循环程序。选用的测序引物的Tm值稍高一些,有助于使反应顺利跨过待测模板的二级结构区,也有助于降低非特异反应。5.探针的设计探针的设计,根据不同的用途各有其设计特点,这里只是就通用的原则进行讨论:①探针的长短一般在20-50核苷酸之间,过长合成成本高,且易出现聚合酶合成错误,杂交时间长。太短则特异性下降。②注意G和C的含量努力控制在40-60%,同时一种碱基连续重复不超过4个,以免非特异性杂交产生。 DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。

    荧光定量PCR仪因操作方便、运行速度快、实验结果准确,受到越来越多的分子生物学研究者青睐。在实验技术成熟的现今,难得不是实验技术上的问题——而是选择哪一种荧光定量PCR仪——你要征询实验室成员的意见、分析实验室目前乃至将来的需求、平衡实验室的预算,更要详细研究各种极富诱惑力的宣传资料。面对各种不同性能的产品,您又该如何选择呢?首先建议大家走出认识荧光定量PCR的两个误区:误区一:仪器通道越多越好随着PCR技术的成熟运用,多重扩增越来越热闹,荧光定量PCR仪也不能幸免。在使用有些厂家5通道的荧光定量仪时,为了确保实验结果的精确性和准确性都要在实验中使用ROX(一种荧光染料)或Referencedye,这些荧光染料都必须单独使用一个检测通道。这样以来,真正能检测多重PCR荧光信号的有效通道只有4个,而且使用校正染料可能会增加后期的使用成本。考虑多重荧光定量PCR的通道数的时候也应该从实验室实际情况出发,多重PCR并非人人适用、人人可用,因为它使实验复杂化了。误区二:real-timePCR仪无需梯度功能对于使用染料法的定量PCR反应,虽然有各种各样的PCR引物设计软件或者经验公式计算熔解温度(Tm值),但运用的公式不同、引物序列不同。PCR技术起初的临床应用就是从检测镰状细胞和β-地中海贫血的基因突变开始的。国产实验室PCR仪规格有哪些

PCR扩增仪通常由热盖部件、热循环部件、传动部件、控制部件和电源部件等部分组成。国产梯度PCR仪厂家直销价

    PCR仪的基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成:1、模板DNA的变性:模板DNA经加热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;2、模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;3、引物的延伸:DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链重复循环变性--退火--延伸三过程,就可获得更多的“半保留复制链",而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2~4分钟,2~3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍(Plateau)。到达平台期所需循环次数取决于样品中模板的拷贝。在此同时认识到蛋白质是接受RNA的遗传信息而合成的。50年代Zamecnik等在形态学和分离的亚细胞组分实验中已发现微粒体(microsome)是细胞内蛋白质合成的部位。 国产梯度PCR仪厂家直销价

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