PCR基因扩增法在遗传性疾病产前诊断中的应用,遗传病是由于遗传物变化而引起的机体某一功能或缺陷或异常所致的疾病,其根本变化在于遗传物质。地中海贫血(Thalassemia)是一种遗传性慢性溶血性贫血病,是世界上常见且发病比高的一种单基因遗传病。在两广、贵州、四川等地发病率较高,在广西等地高达15%。地中海贫血是由于基因突变造成珠蛋白的不平衡,使结构正常的肽链合成量减少甚至没有合成表现为溶血性贫血。接受累基因种类分为α、β、γ等,其中以α、β地贫为常见,危害了大。珠蛋白基因簇位于人6号染色短臂上,有两个重复基因基因位于α1、α2、两个α基因及其旁侧序列有很大的同源性,易出现染色体不等交换,导致α基因缺失-α地贫。α地贫基因部分缺失有α1基因部分缺失、α2基因缺失、α1及α2基因同时缺失及非缺失型地贫。可以应用PCR技术扩增α1、α2基因从而检测这些基因是否缺失、突变等,从而对α型地中海贫血作出诊断。β地中海贫血基因缺陷主要表现为基因序列中单一核苷酸的突变,或少数碱基的缺失、插入,使正常β珠蛋白肽链合成减注或缺失。应用位点特异性寡核苷探针(Aso)进行PCR产物斑点杂交即可对其作出诊断。 PCR可检测不同细胞类型、组织和生物体在特定时间点的基因表达差异。国产品牌PCR仪厂家报价
在普通PCR仪的基础上增加一个荧光信号采集系统和计算机分析处理系统的PCR仪称作荧光定量PCR仪。其PCR扩增原理和普通PCR仪扩增原理相同,只是PCR扩增时加入的引物是利用同位素、荧光素等进行标记,使用引物和荧光探针同时与模板特异性结合扩增。扩增的结果通过荧光信号采集系统实时采集信号连接输送到计算机分析处理系统得出量化的实时结果输出。把这种PCR仪叫做实时荧光定量PCR仪(qPCR仪)。荧光定量PCR仪有单通道、双通道和多通道。当只用一种荧光探针标记的时候,选用单通道,有多荧光标记的时候用多通道。单通道也可以检测多荧光的标记的目的基因表达产物,因为一次只能检测一种目的基因的扩增量,需多次扩增才能检测完不同目的基因片段的量。主要用于医学临床检测、生物医药研发、食品行业、科研院校等机构。根据DNA扩增时升温介质的不同可以将PCR仪分为:变温铝块式PCR仪、水浴式PCR仪和变温式流式PCR仪。1.变温铝块式PCR仪热源用电阻丝、导电热膜、热泵式珀尔帖半导体元件制作,让带有凹孔的铝块升温,用自来水、制冷压缩机或半导体降温。优点:温度传导快,各管的扩增一致性好;反应管规格一致时无须外涂石蜡油;可用微电脑调节温度转换。 实时定量PCR仪询问报价PCR技术不仅可用于基础研究,还适用于日常的临床诊断、法医学调查和农业生物技术研究。
PCR仪的基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成:1、模板DNA的变性:模板DNA经加热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;2、模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;3、引物的延伸:DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链重复循环变性--退火--延伸三过程,就可获得更多的“半保留复制链",而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2~4分钟,2~3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍(Plateau)。到达平台期所需循环次数取决于样品中模板的拷贝。在此同时认识到蛋白质是接受RNA的遗传信息而合成的。50年代Zamecnik等在形态学和分离的亚细胞组分实验中已发现微粒体(microsome)是细胞内蛋白质合成的部位。
1.一般性原则(1)长度:一般引物互补区的长度为16-25bp,引物互补区的4×(G十C)十2×(A十T)不要没有必要大于70,一般也不要低于50(2)G十c含量:好在45%一55%之间,但有时受模板限制,无法理想化。但在有几种选择时,可以把G十c含量接近50%作为参数之一(3)碱基分布的随机性:应避免连续出现4个以上的单一碱基。尤其是不应在其3’端出现超过3个的连续G或C,否则会使引物在G十C富集序列区错误引发。(4)引物自身:不能含有很长的牢固的自身互补序列,尤其是引物3‘端回折形成的发夹不要一般超过3碱基,否则会影响引物与模板的结合(5)引物之间:两个引物之间不应有很长的牢固的互补或同源碱基,尤应避免3’端的互补重叠。2.具体原则①引物长度;特异性一般通过引物长度和退火温度控制。如果PCR的退火温度设置在近于引物Tm值(引物/模板双链体的解链温度)几度的范围内,18到24个碱基的寡核苷酸链是有很好的序列特异性的。引物越长,扩增退火时被引发的模板越少。为优化PCR反应,使用确保溶解温度不低于54℃的短的引物,可获得好的效率和特异性。总的来说,好在特异性允许的范围内寻求安全性。每增加一个核苷酸,引物特异性提高4倍;这样,大多数应用的短引物长度为18个核苷酸。 PCR(聚合酶链反应)是一种体外核酸扩增技术,又称为无细胞分子克隆法.
基因扩增实验又称PCR实验,其特点是能将微量的DNA大幅增加,PCR是分子生物学研究和实验的常规方法,应用于生物学各个领域,例如:特定基因的检测和诊断,DNA指纹、个体识别、亲子鉴定及法医物证,动、植物检疫,动物及其衍生产品检测,动物饲料、化妆品、食品卫生检测,转基因作物与转基因微生物检测等。PCR实验室原则上为试剂准备区、样品制备区、扩增区和扩增产物分析区四个单独的工作区域并设有走廊,各工作区域应设缓冲间,工作区与缓冲间宜安装连锁装置。不同功能的工作区应是分隔的,各工作区有明显的标志,不能直通,如果紧密相连,需安装物品传递窗。前两区为扩增前区,后两区为扩增后区,扩增前区与扩增后区应严格分开。实验材料、试剂、记录纸、笔、清洁材料等,只能从扩增前区流向扩增后区,即从试剂准备区→样品制备区→扩增区→扩增产物分析区,不得逆向流动。实验室的气流也应从扩增前区流向扩增后区,不得逆向流动。各工作区顶部应安装紫外灯,紫外灯的波长为254nm,每20㎡一支40W的紫外灯。PCR实验室分为四个单独工作区域:试剂贮存和准备区,标本制备区,扩增反应混合物配置和扩增区,扩增产物分析区.国产实验室PCR仪价格表格
普通PCR仪主要应用于科研、教学、临床医学、检验、检疫等。国产品牌PCR仪厂家报价
从世界范围来看,美、欧、日等发达地区的销售产业发展历史悠久,无论是销售产品制造业还是销售服务业,都处于全球优先地位。而泰国、印度等东南亚及南亚地区,销售产业虽然起步晚,但是发展较快,已成为经济社会发展重要组成部分。贸易型项目新市场加入通常耗资巨大,单一的资本进入往往会形成极大的资本压力,因此一些重大的贸易型项目往往都会通过数家有实力的资本进行组合资本。医药健康方面人才培养体制贫乏,经调查,中国的大学中把物流管理与医药知识结合的专业少之又少,单方面精通的人才对于医药冷链物流无法完全胜任,通过调研冷链物流企业,了解到培养物流人员有关冷链物流的相关知识来胜任冷链物流工作的计划进展缓慢,使得人才成为完善医药健康的重要制约因素。除此之外,我国支付端仍是以医保支付为主,数字化手术室,实验室仪器,新生儿科设备,ICU重症产品链的延伸以及消费医药市场价值的获取也需要进一步探索解决的途径。从数字化手术室,实验室仪器,新生儿科设备,ICU重症产品的健康发展来看依旧有待完善。国产品牌PCR仪厂家报价
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