PCR仪的基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成:1、模板DNA的变性:模板DNA经加热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;2、模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;3、引物的延伸:DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链重复循环变性--退火--延伸三过程,就可获得更多的“半保留复制链",而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2~4分钟,2~3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍(Plateau)。到达平台期所需循环次数取决于样品中模板的拷贝。在此同时认识到蛋白质是接受RNA的遗传信息而合成的。50年代Zamecnik等在形态学和分离的亚细胞组分实验中已发现微粒体(microsome)是细胞内蛋白质合成的部位。 PCR实验室分为四个单独工作区域:试剂贮存和准备区,标本制备区,扩增反应混合物配置和扩增区,扩增产物分析区.力康荧光定量PCR仪价格比较
硬件设计:二通道(X960A)和五通道(X960B)荧光检测系统,LED光源、高分辨率冷光源CCD;所有样品同一时刻采集荧光信号;开放试剂、耗材平台,通用性极强、全封闭样品座设计。温度控制系统:模块采用Peltier-Based技术,扩增效率高,非特异性好-高达5℃/s的升降温速率, 节省用户的时间;高检测灵敏度, 小可检测到单个模板-具有两种温度控制模式,即模块温控和模拟管控,保证检测的灵活性-良好的温控均一性,有效降低了孔间差异,确保低拷贝样品数据的准确测试。基因扩增PCR仪参考价格实时荧光定量PCR仪主要应用于临床医学检测、生物医药研发、食品行业、科研院校等。
它能降解特异性荧光记探针,因此使得间接的检测PCR产物成为可能。(2)此后荧光双标记探针的运用使在一密闭的反应管中能实时地监测反应全过程。这两个发现的结合以及相应的仪器和试剂的商品化发展导致real-timeQ-PCR方法在研究工作中的运用。PCR反应过程中产生的DNA拷贝数是呈指数方式增加的,随着反应循环数的增加,终PCR反应不再以指数方式生成模板,从而进入平台期。在传统的PCR中,常用凝胶电泳分离并用荧光染色来检测PCR反应的终扩增产物,因此用此终点法对PCR产物定量存在不可靠之处。在real-timeQ-PCR中,对整个PCR反应扩增过程进行了实时的监测和连续地分析扩增相关的荧光信号,随着反应时间的进行,监测到的荧光信号的变化可以绘制成一条曲线。在PCR反应早期,产生荧光的水平不能与背景明显地区别,而后荧光的产生进入指数期、线性期和终的平台期,因此可以在PCR反应处于指数期的某一点上来检测PCR产物的量,并且由此来推断模板初的含量。为了便于对所检测样本进行比较,在real-timeQ-PCR反应的指数期,首先需设定一定荧光信号的域值,一般这个域值(threshold)是以PCR反应的前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号(baseline)。
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PCR反应的特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性。力康荧光定量PCR仪价格比较
力康荧光定量pcr仪X960型数据分析系统:向导式的全中文操作界面,直观、清晰、功能 -实时记录荧光信号的原始数据;涵盖多种分析模式:相对/ 定量、标准溶解曲线、终点法等位基因鉴定、高分辨率溶解曲线、等温扩增等;内置统计分析工具和自定义公式编辑工具,数据无需导出,直接在仪器软件中分析完成。力康荧光定量pcr仪X960型其他人性化设计:具有梯度、Touchdown等高级编程功能、WIFI或LAN连接PC端-可实现一台PC机连接多台qPCR;低噪音、低能耗、长寿命。力康荧光定量PCR仪价格比较
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