PCR（聚合酶链式反应）是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温（经常是60°C左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶适反应温度（72°C左右），DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。PCR仪实际就是一个温控设备，能在95℃，55℃，72℃之间很好地进行温度控制。PCR扩增仪又称为PCR基因扩增仪、PCR核酸扩增仪、聚合酶链反应核酸扩增仪，是利用PCR(Polymerasechainreaction，聚合酶链反应)技术对特定DNA扩增的一种仪器设备，被运用于医学、生物学实验室中，例如用于判断检体中是否会表现某遗传疾病的图谱、传染病的诊断、基因复制以及亲子鉴定等。 DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。实时荧光PCR仪询问报价

    目前，采用荧光定量PCR检测技术可以对淋球菌、沙眼衣原体、解脲支原体、人类瘤病毒、单纯疱疹病毒、人类免疫缺陷病毒、肝炎病毒、流感病毒、结核分枝杆菌、EB病毒和巨细胞病毒等病原体进行定量测定。与传统的检测方法相比具有灵敏度高、取样少、快速简便等优点。如：结核菌基因诊断的意义主要表现在：a.区分TB与其它分枝杆菌；b.检测TB耐药基因；c.提高TB的阳性检出率。⑵产前诊断到目前为止，人们对遗传性物质改变引起的遗传性疾病还无法，只能通过产前监测，减少病婴出生，以防止各类遗传性疾病的发生，如为减少X连锁遗传病患儿的出生，从孕妇的外周血中分离胎儿DNA，用实时荧光定量PCR检测其Y性别决定区基因是一种无创伤性的方法，易为孕妇所接受。⑶药物疗效考核对乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)定量分析显示：病毒量与某些药物的疗效关系。HCV高水平表达，干扰素作用不敏感，而HCV低滴度，干扰素作用敏感；在拉米夫定过程中，HBV-DNA的血清含量曾有下降，随后若再度上升或超出以前水平，则提示病毒发生变异。如PCR技术在HBV检测中的应用及意义：a.了解乙肝病毒在体内存在的数量。b.是否复制。c.是否传染，传染性有多强。d.是否有必要服药。 实时荧光PCR仪询问报价PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物.

    基因扩增仪因操作方便、运行速度快、实验结果准确，受到越来越多的分子生物学研究者青睐。面对各种不同性能的基因扩增仪，又该如何选择呢?基因扩增仪的选购误区误区一：仪器通道越多越好随着基因扩增技术的成熟运用，多重扩增越来越热闹，基因扩增仪也不能幸免。从单通道基因扩增仪发展到如今各个厂家都推出4通道、5通道甚至6通道基因扩增仪，眼花缭乱的选择让人无所适从，就有人一不小心走进了“通道越多越好”的误区。在使用有些厂家5通道的基因扩增仪时，为了确保实验结果的精确性和准确性都要在实验中使用ROX或Referencedye，这些荧光染料都必须单独使用一个检测通道。这样以来，真正能检测多重PCR荧光信号的有效通道只有4个，而且使用校正染料可能会增加后期的使用成本。考虑多重基因扩增仪的通道数的时候也应该从实验室实际情况出发，多重基因扩增仪并非人人适用、人人可用，因为它使实验复杂化了。误区二：基因扩增仪无需梯度功能对于使用染料法的定量PCR反应，虽然有各种各样的PCR引物设计软件或者经验公式计算熔解温度(Tm值)，但运用的公式不同、引物序列不同，Tm值的差异会很大。引物的熔解温度决定了退火温度。而且模版中碱基的组合千变万化，对于特殊片断。

    1．一般性原则(1)长度：一般引物互补区的长度为16-25bp，引物互补区的4×(G十C)十2×(A十T)不要没有必要大于70，一般也不要低于50(2)G十c含量：好在45％一55％之间，但有时受模板限制，无法理想化。但在有几种选择时，可以把G十c含量接近50%作为参数之一(3)碱基分布的随机性：应避免连续出现4个以上的单一碱基。尤其是不应在其3’端出现超过3个的连续G或C，否则会使引物在G十C富集序列区错误引发。(4)引物自身：不能含有很长的牢固的自身互补序列，尤其是引物3‘端回折形成的发夹不要一般超过3碱基，否则会影响引物与模板的结合(5)引物之间：两个引物之间不应有很长的牢固的互补或同源碱基，尤应避免3’端的互补重叠。2.具体原则①引物长度；特异性一般通过引物长度和退火温度控制。如果PCR的退火温度设置在近于引物Tm值（引物/模板双链体的解链温度）几度的范围内，18到24个碱基的寡核苷酸链是有很好的序列特异性的。引物越长，扩增退火时被引发的模板越少。为优化PCR反应，使用确保溶解温度不低于54℃的短的引物，可获得好的效率和特异性。总的来说，好在特异性允许的范围内寻求安全性。每增加一个核苷酸，引物特异性提高4倍；这样，大多数应用的短引物长度为18个核苷酸。 基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备，能在变性温度，复性温度，延伸温度之间很好地进行控制。

    PCR实验室又叫基因扩增实验，是一种分子生物学技术，用于放大特定的DNA的片段，可看作生物体外的特殊DNA复制。通过DNA基因追踪系统，能迅速掌握生物体内的病毒含量，其精确度高达纳米级别。PCR实验室运行的条件1、必须拥有标准的的PCR荧光实验室实时荧光定量PCR技术于1996年由美国AppliedBiosystems公司推出，由于该技术不实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，它有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点，目前已得到广泛应用。2、检测设备必须符合标准PCR荧光实验室设置要求荧光定量PCR仪+实时荧光定量试剂+通用电脑+自动分析软件，构成PCR-DNA/RNA实时荧光定量检测系统。3、必须通过国家临床检验中心的验收和认证;4、检测人员必须通过国家临检中心业务培训并取得合格证书。PCR实验室内工作人员必须参加由国家卫生部或各省临床检验中心举办的临床基因扩增培训班，并持证上岗。PCR实验室通过验收，实验室至少必须应有两个以上持有“临床基因检测上岗证”。PCR实验室必须建立严格的实验室管理制度、建立标准化操作程序（SOP）、建立系列质量管理文件等。确保实验室日常运行符合国家卫生部的要求，确保检测结果准确、确保实验室卫生安全。只要样本有一个病原体存在，PCR就可以检测到。实时荧光PCR仪询问报价

PCR可检测不同细胞类型、组织和生物体在特定时间点的基因表达差异。实时荧光PCR仪询问报价

    并含有能用于探针捕捉杂交实验的足够信息。这一长度范围的产物可以通过采用两步扩增循环方法得到，从而减少扩增时间。其他PCR方法有不同的佳产物长度。例如，通过定量的RNA-PCR检测基因表达时，产物应该足够大以便构成竞争性模板，这样，产物和竞争物都能够在凝胶上很容易的分辨出来。这些产物一般在250～750bp范围内。⑦补充说明若在cDNA序列内找寻PCR引物，需特别注意两点：首先，尽力将引物和产物保持在mRNA的编码区域内，因为这是生成蛋白质的独特序列，不像3’末端非编码区域与许多其他mRNA有同源性；第二，尽力把引物放在不同的外显子上，以便使RNA特异的PCR产物与从污染DNA中产生的产物在大小上相区别。若PCR的目的是克隆一个基因或cDNA的特异序列，产物的大小是根据具体应用预选的。在这里，计算机程序可以提供关于期望区域侧翼选择引物对的信息。在选择用来扩增来自不同物种DNA的引物时，应避开mRNA的5’和3’末端非翻译区序列，因为它们可能没有任何的同源性。3．简并引物设计①设计简并引物时，一定要检查靶扩增区域选定氨基酸遗传密码的简并度。很显然，我们期望选择简并度低的氨基酸，达到提高特异性的目的。②充分注意物种对于密码子的偏好性。 实时荧光PCR仪询问报价

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