考虑RNA需求较少的RNA需求可以降低实验成本，同时也可以减少对细胞的潜在毒性。比较不同试剂的RNA用量：不同的转染试剂可能需要不同量的RNA才能达到相同的转染效果。在选择比较好的RNA转染试剂并将其与电穿孔法进行病毒RNA的比较的研究中，某些商业转染试剂在适当优化后，细胞死亡少得多，RNA需求少，转染效率提高3。考虑实验规模：如果实验需要大量转染细胞，那么选择RNA需求较少的试剂可以降低成本。例如，在大规模的细胞培养实验中，选择RNA需求少的转染试剂可以节省成本和资源。四、考虑血清兼容性在有血清的情况下能够递送RNA的转染试剂可以简化实验操作，提高实验的可重复性。血清对转染的影响：一些转染试剂在有血清的情况下可能会降低转染效率，而另一些试剂则可以在血清存在的情况下正常工作。在比较不同商业RNA转染试剂将黄热病病毒（YFV）和丙型肝炎病毒（HCV）RNA复制子递送至Huh7细胞的能力的研究中，讨论了与高效转染相关的因素，以及在存在血清的情况下能够递送RNA的优势3。选择血清兼容的试剂：如果实验需要在有血清的条件下进行，那么选择血清兼容的转染试剂是必要的。例如，在一些细胞培养实验中，血清是细胞生长所必需的。 在转染实验中使用对照对于确定所使用的转染试剂和核酸的效果和效率至关重要。天津西安转染试剂

二、影响因素的差异细胞接种密度：不同类型的细胞在比较好转染效率下的细胞接种密度不同。例如，宫颈*细胞Hela和Siha的比较好接种密度为每24孔板的每孔1.5×10?个细胞1，而研究中Caco-2细胞的比较好接种密度为2×10?9。DNA用量：各种细胞所需的DNA用量也存在差异。如PC12细胞转染的比较好DNA用量为2μg3，而Caco-2细胞转染时比较好DNA用量为4μg9。脂质体与DNA的比例：不同细胞类型对应的比较好脂质体与DNA的比例不同。Hela细胞中miRNA与脂质体比例为1:0.5，Siha细胞中为1:0.71；Caco-2细胞转染时比较好脂质体与DNA比例为2.5:19。复合物形成时间和孵育时间：不同细胞类型对脂质体-DNA复合物的形成时间和细胞与复合物的孵育时间要求不同。例如，Hela和Siha细胞未明确提及复合物形成时间和孵育时间，而Caco-2细胞的比较好脂质体-DNA复合物形成时间为30min，细胞与复合物孵育时间为6h9。内蒙古体内转染试剂在选择合适的小RNA分子进行转染相关功能分析之前，应先确定其实验需要。

优化电转方法筛选**适电压和脉冲时间：不同细胞种类电转所需的**适电压和脉冲时间不同。例如，人成纤维细胞电转modRNA的**适电压为440V，**适脉冲时间为30ms；Hela、293T、3T3细胞电转**适电压分别为425V、400V、440V，**适脉冲时间均为30ms；人/兔外周血来源的悬浮的单个核细胞的**适电压分别为840V和860V，**适脉冲时间均为20ms。通过筛选**适电压和脉冲时间，可以提高RNA转染效率，同时证明了电转法转染modRNA进入细胞的可行性，且可同时将两种modRNA导入同一个细胞内6。RNA电穿孔高效转染原代淋巴细胞：使用体外转录的mRNA通过电穿孔可以实现高基因转染效率和低转染相关毒性。例如，在用GFP或mCD62L转染的受激原代人和鼠T淋巴细胞中观察到90％以上的转基因表达和80％以上的活细胞。GFPRNA对未刺激的人PBMC或鼠脾细胞进行电穿孔，分别产生95％和56％的GFP?细胞。此外，基因表达迅速且持久，对经过RNA电穿孔的T淋巴细胞未观察到不良影响7。

RNA电穿孔高效转染原代淋巴细胞：使用体外转录的mRNA通过电穿孔可以实现高基因转染效率和低转染相关毒性。例如，在用GFP或mCD62L转染的受激原代人和鼠T淋巴细胞中观察到90％以上的转基因表达和80％以上的活细胞。GFPRNA对未刺激的人PBMC或鼠脾细胞进行电穿孔，分别产生95％和56％的GFP?细胞。此外，基因表达迅速且持久，对经过RNA电穿孔的T淋巴细胞未观察到不良影响7。五、优化共转染方法整合共转染和平行共转染：研究不同的共转染和连续转染方法，特别是体外转录信使RNA（IVTmRNA）。对于在纳米载体形成之前预混合的IVTmRNAs（整合共转染）和同时用单独形成的纳米载体转染细胞（平行共转染），分析决定共转染效率的定量参数。同时递送siRNA和mRNA也表明整合方法的比较高共转染效率，但由于两个**运营实体的峰值输出在动力学上不同，连续交付的效率比较高。核酸与转染试剂的比例对转染效率也有影响。

对细胞活力的影响：一些研究表明，在阳离子脂质体LipofectamineTM2000介导下鸡TRPV6基因RNA干扰（RNAi）质粒转染入成骨细胞的实验中，当转染前细胞融合达到90％以上，质粒DNA与脂质体比例为1:2.5时转染效率比较高，并且在转染后48h转染效果比较好，对细胞的毒性作用较小3。在人肝瘤两种细胞模型中，通过比较LipofectamineRnaimax和Genmute转染剂发现，用基因***的细胞呈现荧光阴性对照siRNA的更高摄取，并且观察到与基因转染的细胞相对于脂质积rnaimax的细胞具有较高的活力6。有研究使用两种常见的RNA干扰（RNAi）转染试剂DharmaFECT1和INTERFERin，在模拟转染中使用非靶向siRNAs，结果表明这些试剂会引起HeLa细胞脂质组的变化，但功能影响仍有待研究，这也暗示在RNAi实验中使用适当的模拟转染对照非常重要。

肌内注射脂质体不能引起强烈的毒性反应，这与肺内或静脉注射途径的情况不同。内蒙古体内转染试剂

在大肠杆菌细胞中复制的质粒通常含有二核苷酸频率为1:16的CpG基序，这与细菌DNA中的频率相似。天津西安转染试剂

脂质体转染是一种常用的基因转染方法，不同类型的细胞在脂质体转染过程中会表现出不同的特性和差异。以下是对脂质体转染对不同类型细胞影响差异的详细分析：

一、转染效率的差异宫颈*细胞：对于Hela细胞和Siha细胞，当细胞接种密度为每24孔板的每孔1.5×10?个细胞，miRNA量为1μl，Hela细胞中miRNA与脂质体比例为1:0.5，Siha细胞中为1:0.7时，24小时后可获得比较高转染效率1。与含血清的培养基相比，只有Siha细胞在无血清培养基中培养时，在转染前能获得更高的转染效率（P＜0.01）1。PC12细胞：lipo2000转染PC12细胞的比较好转染条件为lipo2000用量为5μL，DNA2μg，转染时间为6h，这种条件下的PC12细胞转染率高达40%，且未影响细胞的正常分泌3。HepG2细胞：阳离子脂质体的扩散系数在lipoplex形成过程中与lipoplex的物理化学特性、lipoplex中质粒DNA的可及性以及每代谢活性的基因表达对数密切相关2。随着脂质体尺寸的增加，主要的内吞途径从网格蛋白介导的内吞转变为脂筏介导的内吞，此外，所有脂质体尺寸均观察到巨胞饮作用2。骨髓间充质干细胞：脂质体介导的CD基因在鼠骨髓间充质干细胞中成功表达，于转染48h后达峰值5。

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