携带要转染的特定核酸的载体构建可以进一步分为病毒载体或质粒载体。病毒和质粒通过存在合适的真核启动子促进外源转基因的表达。病毒载体可能在宿主细胞中触发免疫原性反应，而非病毒载体的免疫原性相对较低。需要一种传递机制来促进靶向核酸或载体结构转移到宿主细胞中。其中一些需要物理方法，而另一些涉及使用递送载体，可能是脂质载体或非脂质载体，以帮助增强载体载体复合物与宿主细胞膜之间的接触，从而促进复合物进入细胞。设计和启动转染试验可能具有挑战性，特别是可供选择的转染方法或策略种类繁多的情况***式细胞术可以更精确地定量表达特定荧光基因的细胞，以评估转染效率。DOTAP 转染试剂

**近的研究已经确定了阳离子脂质体（CLs）的某些特征，这些特征增强了它们在体内转运核酸的能力。这些特征包括阳离子头基团及其邻近的脂肪链在主链上呈1,2关系，醚键用于桥接脂肪链到主链，成对的油基链作为疏水系链。无论如何，这些特征虽然不能决定细胞培养中更好的转染能力，但可以在体内实现更好的核酸递送。因此，必须谨慎对待体外和细胞培养的结果，不能必然地用来推断核酸载体在体内的潜力。当这些囊泡在体内引入时，其他因素(如颗粒直径)变得更加重要。使用脂质体时遇到的毒性通常与制剂中阳离子脂质与核酸之间的电荷比、所使用的制剂类型以及所给脂质体的剂量密切相关。较高的电荷比通常对多种细胞类型的毒性更大，包括*细胞系。另外，不同的试剂对细胞的毒性程度不同，毒性是细胞特异性的。目前市面上有超过30种不同的商用CL制剂品种可供选择。由于毒性，脂质体的体内递送必须尽可能靠近目标部位，以尽量减少副作用。海南转染试剂价格人类原代干细胞是另一种公认的难以转染的细胞类型，转染这种细胞类型的挑战仍然是效率低和细胞活力低。

鱼精蛋白作为RNA递送稳定剂具有重要作用，其具体作用机制主要包括以下几个方面：一、保护RNA免受降解鱼精蛋白是一种天然阳离子肽混合物，由于其带正电荷的特性，可以与带负电荷的RNA通过相反电荷驱动耦合23。在生物系统中，RNA很容易被RNase降解，而鱼精蛋白可以与RNA复合，形成稳定的复合物，从而保护RNA免受降解1213。例如，通过将单链RNA（ssRNA）与带正电荷的蛋白鱼精蛋白复合，可以稳定阴离子RNA1213。二、增强细胞穿透性鱼精蛋白不仅可以保护RNA，还能增强RNA的穿透细胞的能力。鱼精蛋白-RNA复合物的形成具有双重功能，一方面保护RNA不被降解，另一方面增强其穿透进入细胞的能力23。这种增强的细胞穿透性可能是由于鱼精蛋白的阳离子性质，使其能够与细胞膜相互作用，促进RNA的进入细胞2。

选择合适的转染试剂阳离子脂质体：如LipofectamineTM2000等阳离子脂质体是常用的转染试剂。通过优化转染条件，如转染前细胞融合度、质粒质量与脂质体体积比及转染时间等，可以提高转染效率。例如，在脂质体介导RNA干扰质粒转染鸡成骨细胞的试验中，当转染前细胞融合达到90％以上，质粒DNA与脂质体比例为1:2.5时转染效率比较高，并且在转染后48h转染效果比较好，对细胞的毒性作用较小4。二、利用天然阳离子肽混合物——鱼精蛋白作为稳定剂和增强剂：鱼精蛋白不仅可以作为肝素的中和药物和缓释胰岛素配方中的化合物，还可以用于核酸的细胞递送。自***作为转染增强剂使用以来，鱼精蛋白已被***用作RNA递送的稳定剂。它能保护RNA免受生物系统内的降解，并增强其对细胞的穿透能力。例如，鱼精蛋白稳定的RNA递送系统可以根据***目标进行调整，如与靶向抗体融合实现精确递送、消化成细胞穿透肽提高转染效率或与功能性聚合物非共价混合等。基因是阳离子聚合物作为转染剂的主要应用。

脂质体转染是一种常用的将外源基因导入细胞的方法，脂质体大小：脂质体的大小也可能影响转染效率。较小的脂质体可能更容易进入细胞，但可能携带的 DNA 量较少。较大的脂质体可能携带更多的 DNA，但可能更难进入细胞。研究发现，阳离子脂质体的大小与转染效率之间存在一定的关系。随着脂质体尺寸的增加，转染的主要途径可能从网格蛋白介导的内吞作用转变为脂筏介导的内吞作用，同时也可能观察到巨胞饮作用。这种变化可能会影响脂质体在细胞内的运输和释放，从而影响转染效率。为了在体外和体内可重复地传递基因和siRNA，含有核酸的脂质体、脂丛和多丛的配方需要精确组成转染试剂。福建转染试剂效率高

由于CRISPR/Cas的发现，基因组编辑领域经历了一场变革。DOTAP 转染试剂

纳米颗粒递送药物并发挥功能的能力在很大程度上取决于它们被细胞摄取的机制。以蒲公英汤剂体为例，研究发现亲溶酶体物质能***抑制蒲公英汤剂体进入细胞；巨胞饮抑制剂细胞松弛素D和阿米洛利能***降低蒲公英汤剂体的胞内摄入，且呈现剂量依赖性，敲减Rac1和PAK1也有效地抑制其进入细胞。这些结果提示蒲公英汤剂体通过内吞进入A549细胞且主要由巨胞饮介导26。同理，RNA转染试剂在某些情况下也可能利用巨胞饮途径进入细胞。电穿孔转染中的内吞途径电穿孔转染是一种用于基因递送的技术，在研究其机制时发现，用冰冷介质处理或在电穿孔转染前使用内吞抑制剂处理三种不同的人类细胞系（HEK293、HCT116和HT29）。结果表明，用冰冷介质、氯丙嗪或染料木黄酮处理会***降低所有三种细胞系的电穿孔转染效率，但阿米洛利处理对电穿孔转染效率影响不***。对于用小干扰RNA（siRNA）处理的细胞，只有敲低网格蛋白重链（CLTC）会导致所有三种细胞系的电穿孔转染效率降低。这些数据表明，网格蛋白介导的内吞作用在电穿孔转染中起着重要作用27。DOTAP 转染试剂