一、体外生物发光试验荧光素试剂的制备：D-荧光素，钾盐，无菌纯水，完全培养基（自行配置）1、用无菌水制备100X荧光素原液（15mg/ml），轻轻颠倒摇动至荧光素完全溶解。混匀后立即使用或分装后-20℃冻存。2、将D-luciferin，potassiumsalt溶解于预热好的组织培养基中制备成浓度为150μg/ml的工作液。用组织培养基1∶100稀释储存液，配置工作液(终浓度150μg/mL)3、去除培养细胞的培养基图像分析前，向细胞培养板中添加1×荧光素工作液，然后进行图像分析-注射器滤膜过滤除菌，0.2μm注：成像前在37℃下对细胞进行短时间孵育可增强信号。荧光染料可以单独使用，也可以组合成复合荧光染料使用。纳米荧光染料蓝色
三、流式细胞仪分析1、取对数生长期的细胞，接种到孔板，过夜培养。2、如果要进行药物刺激，在细胞中加入感兴趣的药物进行干预，继续培养一定时间后，收集细胞，PBS清洗2次。3、加入Rhodamine123工作液重悬细胞，37℃避光孵育15min或更长时间。【注意】：由于细胞种类和实验体系不同，Rhodamine123工作液浓度和孵育时间可以根据预实验或参考文献自行调整。4、用流式细胞仪检测。
四、实验案例1、取对数生长期A549细胞接于六孔板（1*106+2mlDMEM培养基）,37℃培养箱培养4-24h待其贴壁，以便后续实验操作.2、弃掉培养液，PBS洗涤两次.3、用培养基（无血清）稀释Rh123母液制备1～20μMRh123工作液。具体工作浓度取决于细胞类型和细胞浓度。4、将Rh123工作液加入六孔板并在37℃下孵育30分钟.5、去除Rh123工作液并用PBS洗涤三次细胞去除背景色.6、荧光显微镜观察. 纳米荧光染料蓝色Super Fluor 680（效果同Alexa Fluor 680）琥珀酰亚胺酯荧光染料。
除了以上应用，吲哚菁绿还可以用于生物识别和药物输送。在生物识别中，吲哚菁绿可以与特定的生物分子结合，从而实现对这些分子的检测和定量分析。这项技术在生物医学研究和临床诊断中有着广泛的应用前景。此外，吲哚菁绿还可以作为药物输送系统的一部分，将药物包裹在其分子结构中，通过近红外光***释放药物，实现靶向***。吲哚菁绿作为一种多功能的荧光染料，在医学和生物领域具有广泛的应用前景。其绿色溶解度的优良性能，使其能够在水溶液中快速溶解，为其在医学影像学、光热***、生物识别和药物输送等方面的应用奠定了基础。随着科学技术的不断进步，相信吲哚菁绿在未来将发挥更大的潜力，为人类健康事业做出更大的贡献。吲哚菁绿作为一种荧光染料，在医学影像学中的应用是**为突出的。它可以通过静脉注射进入人体血液循环系统，并在近红外激光的照射下发出荧光信号。这种荧光信号可以被**的显像设备捕获和记录，从而形成高分辨率、高对比度的影像。这样的影像可以帮助医生观察和分析血管、淋巴系统以及**等病变的情况，提供重要的诊断依据。
藻红蛋白-藻红蛋白(PE)是一种红色蛋白色素复合物，属于藻胆蛋白家族。它可以在红藻和隐植物中找到，它作为叶绿素色素的附属物。在生物科学中，荧光团可以与蛋白质结合，例如用于抗原检测的抗体等，因为它能够发出明亮的荧光。由于荧光团往往会很快发生光漂白，因此很少在荧光显微镜中使用。它经常用于流式细胞术。※别藻蓝蛋白(APC)-与藻红蛋白一样，别藻蓝蛋白也属于藻胆蛋白家族，是从红藻中分离出来的。在594和633nm的激光线激发下，荧光团的比较大吸光度在650nm处，而荧光发射峰在66nm处。与荧光素偶联物相比，荧光团的灵敏度已显示高5至10倍，并具有许多其他有益特性，包括大斯托克斯位移、高水溶性、长波长发射和耐猝灭。虽然别藻蓝蛋白通常不用于需要光稳定性的应用，但它***用于流式细胞术、ELISA、微阵列等过程以及各种依赖高灵敏度的应用。DiD，DiO，DiI，DiR和DiS 染色的细胞可以分别用经典的FL1，FL2，FL3和FL4流式细胞仪检测。
荧光染料:能发出荧光的染料。在吸收紫外线或可见光后，能把短波长的光转变为波长较长的可见光波而反射出来，呈闪亮的鲜艳色彩。例如，酸性曙红、荧光黄、红汞以及某些分散染料等。它们大多是含有苯环或杂环并带有共轭双键的化合物。荧光染料可以单独使用，也可以组合成复合荧光染料使用。其中复合荧光染料是利用荧光共振能量转移技术合成的荧光染料，由距离非常近、能量可以在彼此间传递的一个供体及一个受体荧光物分子所组成。复合染料在受体分子的激发波长被激发，在供体分子的发射波长发射一个光子。荧光染料发展非常迅速，已开发的用于科研和临床应用的荧光染料已基本覆盖了由紫外到可见光及红外的整个光谱范围。荧光素的衍生物包括异硫氰酸荧光素、俄勒冈绿和羧基萘并荧光素等。纳米荧光染料蓝色
与花青和罗丹明染料一样，荧光素也是一种有机染料。纳米荧光染料蓝色
第二种***使用的DNA染色方法是Hoechst染料，**初由化学公司HoechstAG生产。Hoechst33258、Hoechst33342和Hoechst34580都是邻苯二甲酰亚胺，具有向A-T富集区插入的趋势，因此后者不常使用。与DAPI相似，此类染料受到紫外线激发并在455nm下发射比较大值，在无结合状态下变为510–540nm。Hoechst染料还具有细胞渗透作用，因此可用于固定细胞和活细胞。与DAPI不同是，Hoechst染料毒性更低。DNA染色剂碘化丙啶无法透过细胞膜。在细胞培养中，因为该染色剂无法进入完好的细胞内，所以常常被用来区分活细胞和死细胞。碘化丙啶也是一种结合剂，但对不同的碱基没有特异性。在核酸结合态下，其比较大激发波长为538nm，比较高发射波长为617nm。未结合状态下碘化丙啶的比较大激发和发射被移到较短的波长和较弱的强度。它也可以在不改变其荧光特性的情况下与RNA结合。要区分DNA和RNA，必须使用足够的聚合酶。纳米荧光染料蓝色