在1990年代***使用的绿色荧光蛋白(从水母维多利亚水母克?。┘捌溲苌铮ɡ缭搴炖兜鞍住⒃宓ǖ鞍缀驮搴斓鞍椎龋┦堑苯裆镅а芯恐?*常用的一些生物荧光团。虽然荧光团可用于在细胞、细菌和各种***中表达质粒,但它们的使用有一些缺点,即它可能很耗时,并且在融合时还能够改变某些细胞蛋白的正常生物学功能。此外,与许多其他荧光团相比,生物荧光团的光稳定性和灵敏度较低。绿色荧光蛋白(GFP)绿色荧光蛋白是当下流行的生物荧光团之一,由238个氨基酸组成,其中三个负责发出可见绿色荧光的结构。在水母本身中,荧光团与水母发光蛋白(一种蛋白质)相互作用,当添加钙时会发出蓝光。通过DNA重组,研究人员可以使用负责产生蛋白质的基因来研究给定的基因和蛋白质。在这里,在将复合物插入细胞之前,该基因与另一个基因(负责产生所需蛋白质的第二个基因)结合。如果细胞产生绿色荧光,研究人员就可以明显看出该细胞能够表达目标基因。GFP由488nm激光线激发,可在510nm处检测。来自荧光团的微弱信号可以使用抗GFP抗体放大。作为生物标记物,绿色荧光蛋白用于以下功能:监测各种生理过程*识别蛋白质定位*检测转基因表达Cy5.5含有一个游离胺基,可与多种官能团共轭,包括NHS酯和环氧化合物。湖南外泌体荧光染料
Hoechst33258是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料,对细胞的毒性较低。用于细胞核染色时,推荐的Hoechst33258工作浓度为0.5-10μg/ml。储存条件:-20℃干燥避光保存,有效期一年。注意事项:Hoechst33258对人体有害,请注意适当防护。荧光染料都存在淬灭的问题,建议染色后尽量当天完成检测。为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液??褂獯忝鸱馄?P0126)可以向碧云天订购。为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作注意事项:Hoechst33342对人体有一定刺激性,请注意适当防护。荧光染料都存在淬灭的问题,建议染色后尽量当天完成检测。为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。湖南外泌体荧光染料荧光素的衍生物包括异硫氰酸荧光素、俄勒冈绿和羧基萘并荧光素等。
三:贴壁细胞染色1、将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。2、从培养基中移走盖玻片,吸走过量培养液,但要使表面保持湿润。3、在盖玻片的一角加入100μL的染料工作液,轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。4、37℃孵育细胞2~20min,不同的细胞比较好培养时间不同??梢?0min作为起始孵育时间,之后优化体系以得到均一的标记效果。5、吸干染料工作液,用培养液洗盖玻片2~3次,每次用预温的培养基覆盖所有细胞,孵育5~10min,然后吸干培养基。但要使表面保持湿润。四:结果检测样品可在培养基中进行检测,可通过荧光显微镜成像或流式细胞仪分析。
CY7是一种CY染料。CY为花菁(Cyanine)的缩写,是由奇数个甲基单元连接的两个氮原子组成的化合物。菁类化合物具有波长长、吸收和发射可调、消光系数高的特点CY系染料常被用于蛋白、抗体以及小分子化合物的标记,对于蛋白抗体的标记,可以通过简单的混合反应来完成结合,下面我们介绍了蛋白抗体标记的标记方法,具有一定的参考意义。一、比较好蛋白制备1)为获得标记效果,请制备蛋白(抗体)浓度为2mg/mL。2)蛋白溶液的pH值为8.5±0.5。如果pH值低于8.0,应使用1M3)如果蛋白浓度低于2mg/mL,标记效率会**降低。为获得比较好标记效率,建议**终蛋白浓度范围为2-10mg/mL。4)蛋白必须在不含伯胺(如Tris或甘氨酸)的缓冲液中,和铵离子,否则会影响标记效率。2.染色制备(以CY3-NHS酯为例)将无水DMSO加入CY3-NHS酯小瓶中,制备成10mM储备液。通过移液器或涡旋混合均匀计算。使用前需先使用缩合液(500μg/mL)(HY-D0178)活化另一个可进行后续标记实验。Cy3 (Cyanine 3) 是一种发橘黄色荧光的花青素荧光染料。
为什么要使用荧光染料?虽然不同的染色技术(即考马斯染色、银染色、荧光染色)可用于可视化凝胶电泳分离的蛋白质,但使用荧光染料具有其独特的优势。他们提供:高灵敏度:对于大多数分析物,荧光测量的灵敏度比吸光度测量高1000倍,即使在使用小样本时也可以令人满意地达到ppt(万亿分之一)的检测限??硐咝远段?。输出与样品浓度成正比。低干扰:由于吸收光的材料数量众多,分光光度测量通?;嵊龅礁扇盼侍狻T诮杏獠饬渴辈换嵊龅秸飧鑫侍?,因为只有少数材料具有荧光能力。高通量:荧光测量具有简单而强大的协议,并且可以自动化用于高通量应用。PI常用于细胞凋亡(apoptosis)或细胞坏死(necrosis)的检测,常用于流式细胞仪分析。湖南外泌体荧光染料
生物发光是利用荧光素酶报告基因在体内表达产生的荧光蛋白与体外注射的荧光素底物发生化学反映产生荧光。湖南外泌体荧光染料
D-荧光素是荧光素酶 (Luc) 的天然底物,可催化萤火虫产生典型的黄绿色光。该反应的 560 nm 化学发光在几秒钟内达到峰值,当底物荧光素过量时,光输出与荧光素酶浓度成正比。荧光素酶 (luc) 基因是用于研究和药物筛选的流行报告基因?;Х⒐饧际跫负趺挥斜尘?,使得 luc 报告基因成为检测低水平基因表达的理想选择。标准闪烁计数器可以可靠地测量低至 0.02 pg 的荧光素酶。除了作为基因表达报告者的作用外,荧光素酶还常用于极其灵敏的 ATP 检测中[1]。我们提供萤火虫荧光素酶 (HY-P1004)、荧光素游离酸 (HY-12591A) 及其水溶性钠盐 (HY-12591) 和钾盐 (HY-12591B)。湖南外泌体荧光染料