一、体外生物发光试验荧光素试剂的制备：D-荧光素，钾盐，无菌纯水，完全培养基（自行配置）1、用无菌水制备100X荧光素原液（15mg/ml），轻轻颠倒摇动至荧光素完全溶解。混匀后立即使用或分装后-20℃冻存。2、将D-luciferin，potassiumsalt溶解于预热好的组织培养基中制备成浓度为150μg/ml的工作液。用组织培养基1∶100稀释储存液，配置工作液(终浓度150μg/mL)3、去除培养细胞的培养基图像分析前，向细胞培养板中添加1×荧光素工作液，然后进行图像分析-注射器滤膜过滤除菌，0.2μm注：成像前在37℃下对细胞进行短时间孵育可增强信号。DAPI染色液（DAPI Staining Solution）常用于细胞核染色，可将细胞核染成蓝色。高分子荧光染料蓝色

CY7是一种CY染料。CY为花菁(Cyanine)的缩写，是由奇数个甲基单元连接的两个氮原子组成的化合物。菁类化合物具有波长长、吸收和发射可调、消光系数高的特点CY系染料常被用于蛋白、抗体以及小分子化合物的标记，对于蛋白抗体的标记，可以通过简单的混合反应来完成结合，下面我们介绍了蛋白抗体标记的标记方法，具有一定的参考意义。一、比较好蛋白制备1)为获得标记效果，请制备蛋白(抗体)浓度为2mg/mL。2)蛋白溶液的pH值为8.5±0.5。如果pH值低于8.0，应使用1M3)如果蛋白浓度低于2mg/mL，标记效率会**降低。为获得比较好标记效率，建议**终蛋白浓度范围为2-10mg/mL。4)蛋白必须在不含伯胺(如Tris或甘氨酸)的缓冲液中，和铵离子，否则会影响标记效率。2.染色制备(以CY3-NHS酯为例)将无水DMSO加入CY3-NHS酯小瓶中，制备成10mM储备液。通过移液器或涡旋混合均匀计算。使用前需先使用缩合液(500μg/mL)(HY-D0178)活化另一个可进行后续标记实验。贵州苏州荧光染料Hoechst 33342是一种可透过细胞膜并对DNA染色的细胞核染色试剂，它在嵌入双链DNA后释放强烈的蓝色荧光。

如何选择的染料？

考虑到荧光染料种类繁多，您如何为您的特定应用选择使用哪种染料？以下是您需要考虑的一些因素。※与实验设计的兼容性：虽然它们可能与其他荧光团共享一些光谱相似性，但每种染料都是***的，并且具有不同的功能、激发和发射波长、波段形状和宽度以及光稳定性。为确保成功，请选择与您的实验设计相辅相成的一种。与设备的兼容性：选择与您正在使用的照明源相匹配的染料。在选择合适的荧光仪器时，请考虑仪器的灵敏度、动态范围、稳定性和通量、信噪比和信空白比。为了获得更好的结果，请确保染料的发射曲线与可用的检测方法相匹配。与样品中其他荧光材料的相容性：在双重或三重标记实验中，您选择的染料的发射和激发曲线不应与其他荧光团重叠。由于许多天然存在的细胞成分会以与您选择的染料或探针相同的波长发出荧光，因此您还需要确保可以从背景自发荧光中清楚地识别所选染料产生的信号。

Hoechst33342是一种可透过细胞膜并对DNA染色的细胞核染色试剂，它在嵌入双链DNA后释放强烈的蓝色荧光。Hoechst33342常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。Hoechst33342-DNA的激发和发射波长分别为350nm和460nm。可溶于水。4.染色程序：（1）用PBS或合适的缓冲液制备10～50μMHoechst33342染料。（2）将1/10细胞培养基体积的Hoechst染料溶液加入细胞培养物中（可以用1/10浓度的Hoechst染料缓冲液代替培养基）。（3）在37℃培养细胞10～20分钟。（4）用PBS或合适的缓冲液洗细胞两次。（5）用带有350nm激发波长，460nm发射波长的滤光片的荧光显微镜观察细胞。Super Flour 系列在生物荧光领域已逐渐替代FITC,Cy3, Cy5, Cy5.5, Cy7等荧光染料。

本质上，有机染料的特征在于源自在整个生色团上离域的光学跃迁或源自分子间电荷转移跃迁（从激发电子态的分子内电荷转移）的发射。在这里，表现出源自在整个生色团上离域的光学跃迁的发射的染料被称为共振染料（介观染料），而后者被称为CT染料（电荷转移染料）。花青、罗丹明和荧光素是一些最常见的共振染料，其特点是窄的吸收和发射带（略微结构化），往往相互镜像，以及小的、对溶剂极性不敏感的斯托克斯位移。另一方面，CT染料包括香豆素和丹磺酰荧光团等染料，其特点是与共振染料相比，吸收和发射带结构无结构，分离良好，以及更大的斯托克斯位移。同样，与共振染料相比，CT染料具有更小的摩尔吸收系数和荧光量子产率。对于共振和CT荧光染料，在结构-性质关系众所周知的情况下，可以通过精心设计的策略来微调光谱性质。FITC荧光染料标记方法。光敏剂荧光染料IR780

吲哚菁绿在生物识别和药物输送方面也有广泛的应用。高分子荧光染料蓝色

第二种***使用的DNA染色方法是Hoechst染料，**初由化学公司HoechstAG生产。Hoechst33258、Hoechst33342和Hoechst34580都是邻苯二甲酰亚胺，具有向A-T富集区插入的趋势，因此后者不常使用。与DAPI相似，此类染料受到紫外线激发并在455nm下发射比较大值，在无结合状态下变为510–540nm。Hoechst染料还具有细胞渗透作用，因此可用于固定细胞和活细胞。与DAPI不同是，Hoechst染料毒性更低。DNA染色剂碘化丙啶无法透过细胞膜。在细胞培养中，因为该染色剂无法进入完好的细胞内，所以常常被用来区分活细胞和死细胞。碘化丙啶也是一种结合剂，但对不同的碱基没有特异性。在核酸结合态下，其比较大激发波长为538nm，比较高发射波长为617nm。未结合状态下碘化丙啶的比较大激发和发射被移到较短的波长和较弱的强度。它也可以在不改变其荧光特性的情况下与RNA结合。要区分DNA和RNA，必须使用足够的聚合酶。高分子荧光染料蓝色