免疫荧光通过抗体与示踪物质结合，利用抗原-抗体结合反应，进而对抗原所在的细胞或组织进行定性或定量。由于荧光素所发的荧光可在荧光显微镜下检出，荧光素受激发光的照射而发出明亮的荧光，可以看见荧光所在的细胞或组织，利用定量技术测定含量，从而可对抗原进行细胞定性和定位分析。细胞免疫荧光用途：快速直观显示所检测蛋白的细胞定位。材料与仪器：样品：贴壁细胞；试剂：4% 组织固定液，PBS，Triton X-100，BSA，荧光二抗，免疫荧光染色二抗稀释液，抗荧光猝灭封片液，0.25% 胰酶；器材：6/12/24 孔板，细胞爬片（盖玻片），载玻片，15 ml 离心管。免疫荧光技术可以用于研究药物的靶点和作用机制。CK19免疫抗体

细胞免疫荧光步骤对大家来说一定是很陌生的，他是一种抗原抗体反应，好像对我们来说他显得很遥远的样子，因为我们并不了解他能做什么，通过这种技术可以让我们对抗原或抗体的性质、定位一次来分析出更多的数据。细胞免疫荧光，这对很多人来说都是一次听说这个东西，也不知道他对我们会有什么好处与坏处，科学研究就是这样子的，普通老百姓是不会明白其中的道理的，但是这些研究也是确实的在我们的生活中取得了成果，能够让大家过的更加舒适。VEGF免疫组化免疫荧光技术可以用于研究遗传疾病和基因表达调控。

注意:从加荧光二抗起,后面所有操作步骤都尽量在较暗处进行.DAPI复染核:爬片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加DAPI染液，避光室温孵育10min。封片：爬片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。玻片稍甩干后用抗荧光淬灭封片剂封片。镜检拍照：切片于荧光显微镜下观察并采集图像。（DAPI紫外激发波长330-380nm，发射波长420nm，发蓝光；FITC激发波长465-495nm，发射波长515-555nm，发绿光；CY3激发波长510-560，发射波长590nm，发红光）。两种抗体同时孵育：由于FIT容易萃灭，因此在孵育抗体时后孵育FITC二抗(孵育二抗一定要避光。

免疫荧光的原理：免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。由于抗原抗体反应具有高度的特异性，所以当抗原抗体发生反应时，只要知道其中的一个因素，就可以查出另一个因素。免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体（或抗原）上，与其相应的抗原（或抗体）结合后，在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。直接法:将标记的特异性荧光抗体，直接加在抗原标本上，经一定的温度和时间的染色，用水洗去未参加反应的多余荧光抗体，室温下干燥后封片、镜检。免疫荧光技术可以同时检测多个目标分子，通过不同颜色的荧光染料进行标记。

免疫荧光应用范围：其应用范围极其普遍，可以测定内分泌、蛋白质、多肽、核酸、神经递质、受体、细胞因子、细胞表面抗原、肉瘤标志物、血药浓度等各种生物活性物质。根据诊断类别，又可分为传染性疾病、内分泌、药物检测、免疫学、血型鉴定等。许多物质都可产生荧光现象，但并非都可用作荧光色素。只有那些能产生明显的荧光并能作为染料使用的有机化合物才能称为免疫荧光色素或荧光染料。异硫氰酸荧光素为黄色或橙黄色结晶粉末，易溶于水或酒精等溶剂。分子量为389.4，较大吸收光波长为490495nm，较大发射光波长520530nm，呈现明亮的黄绿色荧光。免疫荧光技术是基于免疫学、生物化学和显微镜技术的重要方法之一。VEGF免疫组化

免疫荧光技术是一种以荧光素标记抗体来定位抗原物质的高度发达的标记免疫技术。CK19免疫抗体

zo-1的免疫荧光，步骤如下：1.细胞在盖片上生长融合到95%-100%时，从孵箱中取出。2.用预温的1×PBS洗3次，每次10分钟。3.4%的甲醛室温固定20-30分钟。4.1×PBS洗3次，每次10分钟。5.0.2%TritonX-100透化2-5分钟。6.1×PBS洗3次，每次10分钟。7.5%BSA室温封闭30分钟。8.加一抗（用1%BSA稀释）放在湿盒里，4度过夜。9.1×PBS洗3次，每次10分钟。10.加二抗(用1%BSA稀释)30分钟，闭光。11.1×PBS洗3次，每次10分钟。12.95%甘油封片。注：4%甲醛，0.2%Triton，5%BSA均用1×PBS稀释。CK19免疫抗体