与常规的PCR的方法相比，dPCR有很好的优势。

***定量

常规PCR和实时荧光PCR定量检测都需要已知拷贝数的标准DNA制定标准曲线，由于样品测定在各种条件上不会完全一致，会造成PCR扩增效率的差异，从而影响定量结果的准确性。而ddPCR不受标准曲线和扩增动力学影响，可以进行***定量。

样品需求量低

在检测珍贵样品和样品核酸存在降解时具有明显的优势。

高灵敏度

ddPCR本质上是将一个传统的PCR反应分成了数万个**的PCR反应，在这些反应中可以精确地检测到很小的目的片段的差异、单拷贝甚至是低浓度混杂样品，且能避免非同源异质双链的形成。

高耐受性

由于目的序列被分配到多个微滴中，***降低了体系间的影响以及背景序列和***物对反应的干扰，扩增基质效应大大减小。 具备一键式自动化操作。南京微流控芯片数字PCR

**个体化诊疗

通过检测T790M位点突变情况，可以更好地评估一代TKI***的疗效及耐药情况并指导第三代TKI靶向药Osimertinib的使用。然而，由于qPCR平台ARMS检测技术的灵敏度有限，没有办法在含大量EGFR基因野生型背景核酸中高效准确的检测到T790M突变。这个时候dPCR技术展现出了****的检测精度，此外，dPCR***定量的优势也能充分发挥出来了，可以监控突变含量变化，做到及早发现耐药。

2.）基因表达分析

伊马替尼（Imatinib）可以有效帮助很多慢性髓细胞白血病（CML）患者延长生存期，但是临床上发现，伊马替尼的疗效与BCR-ABL1融合基因的转录产物表达量有很大的关系。研究人员采用dPCR对CML患者的BCR-ABL1融合基因转录产物进行测定，结果检测下限可以达到0.001%，显示出dPCR在痕量核酸检测方面比qPCR具有无可比拟的优势 常州数字PCR单细胞研究：测序、PCR。

相对于二代测序、基因芯片和定量PCR而言，数字PCR具备以下优势:

● 灵敏度可达到单个核酸分子：检测限低至0.001%，主要系为数字PCR可以实现靶标DNA/RNA的生物浓缩；

● 无需标准曲线活参照基因进行对比来测定核算量，可对靶分子起始量进行***定量，直接独处DNA分子的个数；

● 适合环境复杂样品的检测：终点PCR检测，不依赖Ct值，不依赖扩增效率，能克服PCR***剂的影响，避免样品间的交叉***问题，适合各类复杂环境中的样本进行***定量，如动血样、粪便、尿液、痰液、水样、土壤、植物等；

要了解为什么传统PCR存在限制，务必要了解PCR反应过程中发生了什么。基本PCR运行可以分为三个阶段：指数期每个循环积聚的产物准确加倍（假定**反应效率）。该反应具有高度特异性和精确度。出现指数式扩增，因为所有试剂均新鲜可用，反应的动力学推动反应有利于扩增子加倍。线性期（高变异性）随着反应继续，一些试剂因扩增而被消耗。反应开始减缓，并且每个循环的PCR产物不再加倍。平台期（终点：使用传统方法进行凝胶检测）反应停止，不再产生更多产物，并且如果放置时间够长，PCR产物将开始降解。因为每个样品具有不同的反应动力学，所以每支试管或每个反应将在不同的时间点进入平台期。在平台期可以看到这些差异。在平台期内，传统PCR进行测量，又称为终点检测。检测数量一次可达96个样品。

       数字PCR采用的策略概括起来非常简单，就是“分而治之”（divide and conquer）［1］，这种做法非常类似于计算机科学中的“分治算法”，将一个标准PCR反应分配到大量微小的反应器中，在每个反应器中包含或不包含一个或多个拷贝的目标分子( DNA模板) ，实现“单分子模板PCR扩增”，扩增结束后，通过阳性反应器的数目“数出”目标序列的拷贝数。在实际的数字PCR实验中，事实上是通过呈现两种信号类型的反应器比例和数目进行统计学分析，计算出原始样本中的模板拷贝数。适用复杂样品的检测。无锡流式数字PCR哪家好

MiniDrop?研发团队由微流控、光学、机电学、化学、临床医学、分子生物学等多学科交叉领域的**组成。南京微流控芯片数字PCR

定量PCR和数字PCR的特点：

       5. 目前定量PCR已经能实现高通量样品条件下的自动化操作。   

       6. 数字PCR在单分子层面上的***定量，可以彻底摆脱对标准曲线的依赖而直接给出靶序列的拷贝数，提高了实验结果在批内和批间的稳定性，甚至能用来对标准品进行定标。   

       7. 基于***定量的方式，数字PCR结果的高重复性和高精度可实现微小差异的基因表达分析，如等位基因的不平衡表达、单细胞基因表达分析、microRNA表达分析等等。所谓“微小差异”的标准一般而言是指表达水平的差异在2倍以内。   

       8. 同等条件下，数字PCR在灵敏度方面拥有优势，使得该技术已成为**的液态活检、病原微生物检测、转基因成分测定、宿主残留DNA分析等的热门技术。

浚和（上海）仪器有限公司是一家供应国内外先进仪器和设备的专业供应商和服务商，致力于为客户提供专业的定制化解决方案。多年来，持续为医药、化工、高校、科研单位、检测院等多个行业提供先进的产品和专业的服务。

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