微滴式数字PCR系统在传统的PCR扩增前对样品进行微滴化处理,即将含有核酸分子的反应体系分成成千上万个纳升级的微滴,其中每个微滴或不含待检核酸靶分子,或者含有一个至数个待检核酸靶分子。经PCR扩增后,逐个对每个微滴进行检测,有荧光信号的微滴判读为1,没有荧光信号的微滴判读为0,根据泊松分布原理及阳性微滴的个数与比例即可得出靶分子的起始拷贝数或浓度。
与传统PCR相比所具有的优势
不依赖Ct值或内参基因,即可确定低至单拷贝的待检靶分子的***数目。微滴技术让数字PCR更低成本,且更实用。
双通道荧光检测,支持EvaGreen染料及探针法。上海JUE对定量数字PCR如何选型
研究方向
病原微生物的检测(***、细菌等)
疾病预防控制中心、出入境检验检疫局系统的实验室目前主要采用基于TaqMan探针法的定量PCR体系对病原微生物进行核酸水平的检测,而这些目前正在使用着的检测体系可以无缝地转移到QX200上,从而满足该类实验室对于检测结果的要求:灵敏度更高、重复性更好、无需依赖标准曲线的***定量结果,同时操作简便。
对于其他类型的研究实验室,也可以利用ddPCR灵敏度高的特点,对各种样品中的病原微生物展开***的研究。如HIV抗逆转录***治疗过程中***残留量的监控;HBV耐药突变的检测;HCV的分子分型;抗甲氧西林金黄色葡萄球菌的院内***监控;环境微生物不同功能基因之间的连锁分析等等。 广州广州永诺数字PCR如何选型开放式平台,支持用户自行开发试剂、产品。
与常规PCR方法相比,数字PCR有如下优势:
1、能够***定量:常规PCR定量需要制定已知拷贝数的标准DNA曲线,但是由于待检样本与标准曲线不在统一体系,条件上会存在差异,另外加上PCR扩增效率的差异从而影响定量结果的准确性。而数字PCR不受标准曲线和扩增动力学影响,可进行***定量。
2、样本需求量低:适用于珍贵样本或核酸降解严重的样本。
3、灵敏度高:数字PCR是将传统PCR反应体系分割成数万个**PCR反应,这些反应可以精确地检测很小的目的片段差异、单拷贝甚至低浓度的混杂样本。且能避免非同源异质双链的形成。
4、高耐受性:由于目的序列被分配到多个**反应体系中,***降低了背景信号和***物对反应的干扰,扩增基质效应大大减小。
定量PCR和数字PCR的特点:
1. 在20多年的使用和发展中,定量PCR作为一种技术平台,已经产出海量的数据,在工业界和分子检测的某些应用上,定量PCR已经成为“金标准”。基础研究方面,则形成了被称为MIQE的“定量PCR标准实验指南”。
2. 在定量PCR的各种应用中,基因表达分析(gene expression analysis)的应用比重约占七成,综合各种因素来看,眼下定量PCR还是进行基因表达研究的理想手段。
3. 上述的“各种因素”具体展开,主要包括:通量、自动化程度、各种检测探针与染料、检测通道、成本和可参考文献与protocol的数目等等。
4. 就目前市场上已有的数字PCR设备来看,定量PCR在检测的线性范围上具有优势,意味着同一个run内可对各种表达丰度的样品进行分析。
MicroDrop-100微滴式数字PCR 应用范围如下:
a. 动植物检验检疫,动物源性分析、极微量病原菌检测定量分析、转基因产品检测;
b. 降低筛查成本、缩短检测周期,适用于T13\T18\T21三体综合征等遗传病的风险评估;适用于zhong瘤早期筛查、分子分型、靶向用药和疗效监测等;适用于传染性疾病的早期诊断和诊疗指导;
c. 可用于DNA甲基化的检测、CRISPR-Cas9基因编辑效率检测等。
d.基因表达差异监测单细胞研究:测序、PCR
e.无创产前筛查:低成本、快速、传染性疾?。篐BV、HIV、COVID-19 定量
2个光电倍增管(PMT),灵敏度及增益优于MPCC或CCD。广州广州永诺数字PCR如何选型
单细胞研究:测序、PCR。上海JUE对定量数字PCR如何选型
MiniDrop数字PCR仪由Creator微滴生成仪、Detector微滴检测仪、MD Microchip微流控芯片及MD Plotter数据分析软件组成,该系统的**为微流控微滴生成技术,采用原创性的油液,在40um微管道中利用气压驱动在2分钟内生成50万微滴,单次运行生成400万微滴,微滴体积达皮升级,检测线性范围达到5个数量级,各项指标均超越国内外的主流产品。
MiniDrop创新性采用高压驱动的方法将样本分割成50万份,打破了国外厂商在微滴式数字PCR领域的垄断。 上海JUE对定量数字PCR如何选型
浚和(上海)仪器有限公司是一家供应国内外先进仪器和设备的专业供应商和服务商,致力于为客户提供专业的定制化解决方案。多年来,持续为医药、化工、高校、科研单位、检测院等多个行业提供先进的产品和专业的服务。
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公司主要经营产品包括:等离子清洗机、真空泵、喷雾干燥器、数字PCR、高压灭菌锅、培养箱、切片机、水分测定仪、激光粒度仪、光谱仪、温湿度记录仪等,目前主要合作品牌有:日本雅马拓YAMATO、日本KASHIYAMA、日本HORIBA、广州永诺 、日本KEM等。同时,公司还提供专业的技术服务,如设备的维护、验证等。
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